Thử nghiệm bằng phương pháp thử nghiệm để tìm ra khả năng của một loại vi khuẩn để thủy phân axit amin Tryptophan (có hình)

Thử nghiệm bằng phương pháp thử nghiệm để tìm ra khả năng của vi khuẩn để thủy phân axit amin Tryptophan!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng thủy phân axit amin tryptophan thành indole, vì chúng có thể tạo ra enzyme 'tryptophanase'.

Tryptophan bị thủy phân với việc sản xuất indole, axit pyruvic và amoniac. Indole được phát hiện bởi thuốc thử màu, paradimethylaminobenzaldehyd (p-DMAB, tức là thuốc thử của Kovac), tạo ra một vòng màu hồng. Indole phản ứng với p-DMAB để tạo ra hợp chất 'hợp chất tím đỏ quinoidal (thuốc nhuộm rosindole)', có màu hồng. Chiếc nhẫn được sản xuất ở bề mặt, vì thuốc thử được điều chế trong rượu amyl.

Trong thử nghiệm indole, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong môi trường nước canh có chứa tryptophan. Nếu vi khuẩn có khả năng thủy phân tryptophan thành indole, một vòng màu hồng được hình thành ở bề mặt nuôi cấy nước dùng khi thêm p-DMAB.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, lò ấp, nước dùng tryptone, thuốc thử của Kovac (paradimethylaminobenzaldehyd), khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường nước dùng tryptone hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay. Tryptone hoạt động như một nguồn của tryptophan. Do đó, việc thêm tryptophan vào nước dùng là tùy chọn (Hình 7.3).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và điều chỉnh thành 7, 5 bằng cách sử dụng 0, 1N HC1 nếu nó nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối thành năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 5 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

4. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

5. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

6. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

7. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 48 giờ trong tủ ấm.

8. Thuốc thử màu, para-dimethylaminobenzaldehyd (p-DMAB), (tức là thuốc thử của Kovac) được thả vào các ống canh (mỗi ml 0, 5 ml) và quan sát sau 1 phút.

Cách khác:

7. Các dải giấy được ngâm trong axit oxalic được đặt ở miệng của các ống canh được tiêm, sao cho khoảng một nửa dải giấy vẫn còn bên trong các ống mà không chạm vào nước dùng và nửa còn lại ở bên ngoài. Đối với điều này, giấy lọc được cắt thành dải dài khoảng 35 mm và rộng 5 mm. Các dải được ngâm trong dung dịch nước axit oxalic bão hòa nóng và sấy khô trước khi sử dụng.

8. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 48 giờ trong tủ ấm.

Quan sát:

1. Nhẫn hồng được sản xuất:

Indole dương tính (tức là vi khuẩn có thể chuyển đổi tryptophan thành indole).

2. Nhẫn hồng không được sản xuất:

Indole âm tính (tức là vi khuẩn không thể chuyển đổi tryptophan thành indole).

Cách khác:

1. Màu hồng sản xuất trên dải giấy:

Indole dương tính (tức là vi khuẩn có thể chuyển đổi tryptophan thành indole).

2. Màu hồng không được sản xuất trên dải giấy:

Indole âm tính (tức là vi khuẩn không thể chuyển đổi tryptophan thành indole).