Thí nghiệm nuôi cấy virus động vật trong trứng gà phôi (có hình)

Thí nghiệm nuôi cấy virus động vật trong trứng gà phôi!

Nguyên tắc:

Virus chỉ có thể phát triển trong các hệ thống sống. Chúng không thể phát triển trong môi trường không sống như môi trường thạch dinh dưỡng hoặc nước canh dinh dưỡng. Do đó, việc trồng trọt của chúng cần các tế bào chủ dễ bị nhiễm virus cụ thể.

Các vi-rút như vi khuẩn, lây nhiễm và phát triển trong các tế bào vi khuẩn được nuôi cấy bằng cách sử dụng nuôi cấy tế bào vi khuẩn làm hệ thống sống.

Ví dụ, coliphage virus (một loại vi khuẩn) được nuôi cấy bằng cách nuôi cấy vi khuẩn E. coli. Ngược lại, virus động vật, lây nhiễm và phát triển trong cơ thể động vật, đòi hỏi phải có hệ thống động vật sống nhạy cảm.

Ba hệ thống động vật sống được sử dụng để nuôi cấy virus động vật trong phòng thí nghiệm như sau:

1. Động vật dễ mắc bệnh:

Trong kỹ thuật này, virus được nuôi cấy được phép phát triển trong cơ thể của động vật sống như chuột hoặc chuột lang, dễ bị nhiễm virut đó. Kỹ thuật này không còn được sử dụng mà đã được thay thế bằng các kỹ thuật kinh tế, hiệu quả và gần đây hơn sau đây.

2. Nuôi cấy mô:

Đó là một kỹ thuật rất tinh vi. Ở đây, các tế bào động vật dễ bị nhiễm virut được nuôi cấy và cũng được biết là nhân lên nhanh chóng trước tiên được phân lập từ mô sống thích hợp của động vật. Những tế bào này được đặt trong một bình thủy tinh hoặc nhựa chứa môi trường dinh dưỡng cực kỳ phong phú. Các tế bào gắn vào bề mặt của tàu và tiếp tục phân chia cho đến khi toàn bộ bề mặt được phủ một lớp tế bào đơn chất hợp lưu. Điều này được gọi là nuôi cấy mô.

Sau đó, virus được nuôi cấy được đưa vào nuôi cấy mô nhạy cảm. Virus lây nhiễm các tế bào sống của nuôi cấy mô, phá hủy bộ máy trao đổi chất của chúng và nhân lên nhanh chóng, do đó phát triển mạnh mẽ trong các tế bào.

3. Trứng gà phôi thai:

Trong kỹ thuật đơn giản và kinh tế này, virus được nuôi cấy được tiêm vào trứng gà phôi. Virus phát triển bên trong trứng gà sống và gây bệnh trong phôi, biểu hiện bằng một số triệu chứng bệnh (ảnh hưởng tế bào chất) đặc trưng cho virus đó. Sự hiện diện của những triệu chứng này cho thấy sự phát triển của virus đó trong trứng.

Vật liệu thiết yếu:

Hai quả trứng gà phôi, dụng cụ đốt nến, cồn iốt, bông thấm, cồn 70%, một mũi khoan nhỏ, pha loãng 1: 2 của virus Newcastle, ống tiêm, ống dẫn tinh vô trùng, nước muối vô trùng, đĩa petri, vòi đốt, máy ấp trứng.

Thủ tục:

1. Hai quả trứng gà được phôi hóa bằng cách sử dụng một thiết bị nến để chứng minh khả năng tồn tại của phôi. Phôi là khả thi, nếu nó cho thấy sự chuyển động để đáp ứng với nhiệt từ ánh sáng. Ngoài ra, vị trí của túi khí và các mạch máu lớn được xác định và đánh dấu trên vỏ trứng trong quá trình đốt nến (Hình 8.7).

2. Vỏ được khử trùng qua túi khí bằng cồn iốt và sau đó được để khô. Cùng một nơi được lau bằng bông thấm với 70% cồn.

3. Mũi khoan nhỏ được khử trùng bằng cách nhúng vào cồn 70% và sau đó đốt lửa.

4. Sử dụng mũi khoan này, một lỗ nhỏ được tạo vô trùng trên vỏ trên túi khí ở khu vực cách xa các mạch máu.

5. 0, 2 ml dung dịch pha loãng 1: 2 của virus Newcastle được tiêm vô trùng vào khoang allantoic của một trong hai quả trứng bằng cách sử dụng ống tiêm tiệt trùng. Điều này được thực hiện bằng cách giữ trứng ở vị trí thẳng đứng, đưa kim của ống tiêm xuyên qua lỗ trên vỏ đến chuôi của nó ở góc 45 °, xuyên qua màng túi khí và thâm nhập vào khoang allantoic. Trứng được tiêm vi-rút này đóng vai trò là 'trứng thử nghiệm'.

6. Sau khi tiêm, kim được rút và lỗ trên vỏ được bịt kín bằng ống dẫn tinh nóng vô trùng.

7. Sử dụng kỹ thuật tương tự, 0, 2 ml nước muối vô trùng được cấy vào trứng gà đã phôi khác, đóng vai trò là 'trứng kiểm soát'.

8. Cả hai quả trứng được ủ ở 37 ° C trong 3 đến 4 ngày trong lồng ấp với độ ẩm thích hợp.

9. Các quan sát được ghi nhận mỗi ngày.

10. Một khi cái chết đã được xác định, phôi bị bong ra khỏi vỏ của nó và các nội dung được đổ vào một đĩa petri và quan sát lại.

11. Tất cả các vật liệu bị ô nhiễm được loại bỏ vào cốc có chứa bột tẩy trắng.

Quan sát:

1. Trứng được thắp sáng hàng ngày trong quá trình ấp và quan sát thấy cái chết của phôi được chứng minh bằng sự chấm dứt chuyển động, thường xảy ra 3 đến 4 ngày sau khi nhiễm virus.

2. Một khi cái chết đã được xác định, phôi bị bong ra khỏi vỏ của nó và các nội dung được đổ vào một đĩa petri. Nó được quan sát cho các tổn thương hoại tử và bằng chứng xuất huyết.

3. Trứng đối chứng được kiểm tra bằng chứng về tác động của tế bào chất.

4. Các quan sát được ghi lại trong Bảng 8.2.