Thí nghiệm xác định vi khuẩn chưa biết (có hình)

Thí nghiệm xác định vi khuẩn chưa biết!

Nguyên tắc:

Xác định vi khuẩn chưa biết là một trong những trách nhiệm chính của các nhà vi trùng học. Các mẫu máu, mô, thực phẩm, nước và mỹ phẩm được kiểm tra hàng ngày tại các phòng thí nghiệm trên khắp thế giới về sự hiện diện của các vi sinh vật gây ô nhiễm.

Ngoài ra, các tổ chức công nghiệp liên tục sàng lọc các vật liệu để phân lập các vi khuẩn hoặc vi khuẩn sản xuất kháng sinh mới sẽ làm tăng năng suất của các sản phẩm bán trên thị trường, như vitamin, dung môi và enzyme. Sau khi phân lập, các vi khuẩn chưa biết này phải được xác định và phân loại.

Khoa học phân loại được gọi là phân loại học và liên quan đến việc tách các sinh vật sống thành các nhóm có liên quan với nhau. Cẩm nang Vi khuẩn Xác định của Bergey, ấn bản thứ 8, là khóa phân loại chính thức có chứa các đơn đặt hàng, họ, chi và loài của tất cả các vi khuẩn được phân loại đã biết (Phụ lục III).

Với kiến ​​thức cơ bản về phương pháp nhuộm màu, kỹ thuật phân lập, dinh dưỡng vi khuẩn, hoạt động sinh hóa và đặc điểm sinh trưởng của vi khuẩn, việc xác định bất kỳ vi khuẩn chưa biết nào trở nên dễ dàng hơn.

Đặc điểm của một số vi khuẩn đã được đưa ra trong Bảng 7.2. Các vi khuẩn khác có thể được xác định theo cách tương tự dựa trên các quan sát và kết quả thu được sau các quy trình thí nghiệm.

Vật liệu thiết yếu:

Slides, slide khoang, đĩa petri, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình đựng, lò ấp, môi trường dinh dưỡng, môi trường thạch dinh dưỡng, thuốc thử nhuộm gram, môi trường và thuốc thử, các khuẩn lạc biệt lập hoặc nuôi cấy thuần chủng vi khuẩn.

Thủ tục:

1. nhuộm gram của vi khuẩn chưa biết được thực hiện. Bên cạnh nhuộm gram, hình thái và sự sắp xếp của nó cũng được ghi lại. Kiểm tra khả năng di chuyển của vi khuẩn được xác định bằng cách chuẩn bị thả thả (Hình 7.25).

2. Sử dụng kỹ thuật tiêm vô trùng, vi khuẩn được cấy vào hai môi trường thạch dinh dưỡng, ống canh dinh dưỡng và vào đĩa thạch dinh dưỡng bằng phương pháp tiêm chủng. Sau khi ủ, một nền văn hóa nghiêng được sử dụng để xác định các đặc điểm văn hóa của vi khuẩn chưa biết.

Thứ hai được sử dụng như một nền văn hóa phụ chứng khoán, nên cần phải lặp lại bất kỳ thử nghiệm nào. Đặc điểm tăng trưởng cũng được quan sát trong các đặc điểm của ống canh và thuộc địa trên đĩa.

3. Thực hiện chăm sóc trong kỹ thuật vô trùng, để không làm nhiễm bẩn môi trường nuôi cấy và nhờ đó thu được kết quả giả, vi khuẩn được tiêm vào môi trường tương ứng để thực hiện các xét nghiệm sinh hóa khác nhau.

4. Môi trường nuôi cấy được ủ ở nhiệt độ yêu cầu trong khoảng thời gian cần thiết.

Quan sát:

1. Trong nhuộm gram, bên cạnh phản ứng gram, hình thái và sự sắp xếp của vi khuẩn cũng được ghi lại.

2. Các đặc điểm văn hóa của vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng, trên môi trường thạch và trên đĩa thạch dinh dưỡng được ghi nhận.

3. Kết quả của các phản ứng sinh hóa được ghi lại.

Giải thích kết quả:

1. Sử dụng dữ liệu được ghi ở trên (Ví dụ, xem Bảng 7.1) và với sự trợ giúp của Sổ tay Vi khuẩn Xác định của Bergey, vi khuẩn được xác định là chi và loài của nó. Cần lưu ý rằng, kết quả có thể thay đổi tùy thuộc vào chủng của từng loài được sử dụng và thời gian vi khuẩn được duy trì trong nuôi cấy.

Các kết quả quan sát được có thể không hoàn toàn giống với kết quả dự kiến. Do đó, vi khuẩn phù hợp nhất với kết quả được chọn. Các đặc điểm nhận dạng của một số vi khuẩn đã được đưa ra trong Bảng 7.2.

2. Ngoài ra, bằng cách sử dụng dữ liệu được ghi ở trên, số mã được đưa ra cho kết quả được ghi (Xem Bảng 7.3) và vi khuẩn được xác định dễ dàng với sự trợ giúp của chương trình máy tính có sẵn cho Apple II, IBM PC hoặc TRS-80.

Chương trình được thiết kế để xác định vi khuẩn chưa biết dựa trên tỷ lệ phần trăm tương đồng giữa vi khuẩn chưa biết và vi khuẩn đã biết đối với các quan sát trên.

Để bắt đầu chương trình cho Apple II hoặc IBM-PC:

(a) Đĩa được đưa vào ổ đĩa bên trái.

(b) Máy tính được bật.

(c) Các hướng dẫn chương trình được theo sau bằng cách gõ các câu trả lời, số lượng vi khuẩn chưa biết và số mã khi các câu hỏi xuất hiện trên màn hình.

Để bắt đầu chương trình cho TRS-80:

(a) Máy tính được bật.

(b) Đĩa được chèn vào ổ đĩa dưới cùng.

(c) Nút màu cam được nhấn.

(d) Khi được hỏi, ngày nhập (MM / DD / YY) nhập vào.

(e) Nút màu cam được nhấn một lần nữa.

(f) Hướng dẫn chương trình được theo sau bằng cách nhập các câu trả lời, số lượng vi khuẩn chưa biết và số mã khi các câu hỏi xuất hiện trên màn hình.

E. Phương pháp tự động xác định vi khuẩn chưa biết:

Xác định vi khuẩn chưa biết bằng phương pháp thủ công sử dụng phản ứng nhuộm màu, kiểm tra vận động, đặc điểm văn hóa và xét nghiệm sinh hóa là một quá trình rườm rà, kéo dài và tốn thời gian. Để làm cho quá trình dễ dàng và ngắn, phương pháp tự động đã được phát triển.

Các phương pháp này về cơ bản sử dụng các xét nghiệm sinh hóa tương tự như được sử dụng trong các phương pháp thủ công, nhưng ở đây nó được thực hiện một cách tự động và việc giải thích được thực hiện với một chương trình hỗ trợ máy tính.

Hai hệ thống như vậy được sử dụng hiện nay để nhận dạng vi khuẩn tự động được đưa ra như sau:

1. Hệ thống API nhỏ

2. Hệ thống VITEK 2

F. Xác nhận thêm:

(1) Xét nghiệm huyết thanh học:

Các xét nghiệm huyết thanh học có thể được thực hiện để xác nhận thêm về vi khuẩn được xác định. Đối với sự đình chỉ của các vi khuẩn được xác định (nói X), một giọt kháng huyết thanh (chống X) chống lại vi khuẩn đó được trộn lẫn. Nếu nó dẫn đến sự hình thành các khối hoặc kết tủa (phức hợp X-anti-X), thì xác định được xác nhận.

Các kháng huyết thanh cho các vi khuẩn khác nhau có sẵn trên thị trường. Chúng được sản xuất thương mại trong các phòng thí nghiệm khác nhau. Kháng nguyên của vi khuẩn đặc biệt được tạo ra bằng cách tiêm tế bào bị giết hoặc suy yếu của những vi khuẩn đó (nói X) vào động vật thí nghiệm.

Là một cơ chế bảo vệ, động vật chủ tạo ra các kháng thể (chống X) chống lại vi khuẩn đó tồn tại trong máu. Máu được thu thập từ động vật này và huyết thanh của nó được phân lập bằng các kỹ thuật đặc biệt. Huyết thanh này, chứa kháng thể chống lại vi khuẩn đó được gọi là kháng huyết thanh của vi khuẩn đó.

(2) Xét nghiệm PCR:

Xét nghiệm Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là phương pháp phân tử nhanh để xác nhận vi khuẩn được xác định. Kỹ thuật này rất thường được sử dụng để phát hiện các loại vi khuẩn và vi rút khác nhau một cách nhanh chóng và chính xác.