Thí nghiệm: Kiểm tra độ di động của vi khuẩn: bằng cách treo chuẩn bị thả (có hình)

Nhằm mục đích thực hiện kiểm tra khả năng vận động của vi khuẩn, bằng cách treo chuẩn bị thả, để tìm hiểu xem đó là động cơ hay không vận động.

Mục đích:

Động lực có nghĩa là khả năng di chuyển bằng sức mạnh của chính mình. Dựa trên sự vận động, vi khuẩn có thể được chia thành hai nhóm như sau.

(1) Vi khuẩn di động:

Một vi khuẩn, có khả năng di chuyển nội tại trong môi trường xung quanh, trong đó nó vẫn lơ lửng, là một vi khuẩn vận động.

(2) Vi khuẩn không di động:

Một vi khuẩn, không có khả năng di chuyển nội tại trong môi trường xung quanh, trong đó nó vẫn lơ lửng, là một vi khuẩn không di động. Vi khuẩn không vận động có thể cho thấy sự linh hoạt rõ ràng, xuất phát từ sự di chuyển màu nâu của chúng gây ra bởi sự bắn phá của các phân tử nước trong môi trường xung quanh, trên các tế bào vi khuẩn.

Trong giá treo ướt, mặc dù có thể quan sát được hình dạng và kích thước của vi khuẩn, sự linh hoạt có thể bị cản trở, vì hệ thống treo được ấn giữa nắp trượt và nắp trượt. Đó là lý do tại sao; chuẩn bị thả thả hoặc thử nghiệm vận động được thực hiện để quan sát rõ ràng sự di chuyển của vi khuẩn, bên cạnh hình dạng và kích thước của chúng. Nó rất hữu ích trong việc xác định vi khuẩn.

Nguyên tắc:

Một giọt rất nhỏ huyền phù vi khuẩn được treo từ trung tâm của một nắp trượt vào khoang của một khoang trượt. Việc thả treo được quan sát dưới kính hiển vi sử dụng vật kính ngâm dầu. Nếu vi khuẩn là động lực, các tế bào của nó có thể được nhìn thấy có sự di chuyển thất thường trong môi trường xung quanh.

Ngược lại, nếu nó không di động, các tế bào của nó vẫn tĩnh trong môi trường mà không có bất kỳ chuyển động nào hoặc có thể cho thấy chuyển động màu nâu do sự bắn phá của các phân tử nước trong môi trường, trên các tế bào vi khuẩn.

Vật liệu thiết yếu:

Trượt khoang, trượt nắp, thạch dầu hoặc Vaseline, dầu ngâm, nuôi cấy vi khuẩn, vòng lặp và kính hiển vi 24 giờ (hợp chất, trường tối hoặc tương phản pha).

Thủ tục:

1. Một rãnh trượt được làm sạch đúng cách dưới vòi nước, sao cho nước không còn như giọt trên bề mặt của nó. Một slide khoang là một slide thủy tinh với một vết lõm tròn nhỏ ở trung tâm, trong đó một giọt nhỏ của vi khuẩn có thể treo (Hình 5.3).

2. Trượt được làm khô bằng cách lau bằng giấy kinh thánh và sau đó, di chuyển nó trên ngọn lửa hoặc giữ nó dưới ánh mặt trời.

3. Một vòng thạch dầu hỏa (hoặc vaseline) được áp dụng xung quanh khoang.

4. Một vòng lặp được khử trùng trên ngọn lửa và làm mát. Một loạt các huyền phù vi khuẩn được lấy từ môi trường nuôi cấy 24 giờ một cách vô trùng. Một giọt nhỏ của hệ thống treo được đặt ở trung tâm của một tấm che. Nuôi cấy nước canh không được quá 24 giờ, vì vi khuẩn có thể mất khả năng vận động, khi chúng lớn lên.

5. Trượt khoang được đảo ngược và đặt trên nắp trượt, theo cách mà, khoang bao gồm các giọt.

6. Trượt và trượt nắp được ấn với nhau nhẹ nhàng, để khoang được niêm phong. Cần cẩn thận để thấy rằng không có phần nào của khoang chạm vào giọt.

7. Trượt được đảo ngược nhanh chóng, sao cho giọt rơi vào khoang mà không chạm vào nó.

8. Slide được cắt theo giai đoạn của kính hiển vi.

9. Các cạnh của sự sụt giảm được tập trung dưới mục tiêu năng lượng thấp.

Những lý do để tập trung vào cạnh của sự sụt giảm như sau:

(a) Độ tương phản tốt hơn thu được do sự khác biệt về chỉ số khúc xạ của độ rơi và độ che phủ.

(b) Khi thả rơi, nó hướng về phía rìa, trong đó cạnh chứa ít số lượng vi khuẩn được quan sát rõ ràng cho sự vận động.

10. Một giọt dầu ngâm được đặt trên tấm che ngay phía trên giọt treo và cạnh của giọt treo được quan sát dưới mục tiêu ngâm dầu của kính hiển vi. Tốt hơn là nên sử dụng kính hiển vi tương phản pha hoặc trường tối để quan sát rõ ràng.

Quan sát (Mục tiêu ngâm trong dầu):

1. Động lực:

Động lực hoặc không động lực

2. Hình dạng của vi khuẩn:

Hình cầu (coccus)

Hình que (trực khuẩn)

Giống như dấu phẩy (Vibrio)

Xoắn ốc (xoắn khuẩn)

3. Sắp xếp vi khuẩn:

Cặp (diplobacillus / Diplococcus)

Trong bốn (tetrads)

Trong chuỗi (streptococcus / streptobacillus)

Các cụm giống như nho (staphylococcus)

Hình khối (sarcinae hoặc octet).

4. Kích thước của vi khuẩn:

Bằng cách ước tính bằng mắt, hãy vẽ bản đồ của trường theo mục tiêu ngâm dầu.

(3) Nhuộm:

Mục đích nhuộm màu:

Chỉ số khúc xạ của tế bào vi khuẩn rất gần với nước, trong đó chúng lơ lửng trong quá trình quan sát và cả với kính trượt, trên đó chúng được quan sát dưới kính hiển vi. Do đó, rất khó để quan sát chúng rõ ràng.

Để khắc phục khó khăn này, các tế bào được tô màu bởi các vết bẩn, tạo ra màu sâu cho các tế bào và màu sáng cho môi trường xung quanh, trong đó chúng bị treo. Các tế bào màu sâu có một sự tương phản rõ ràng với nền màu sáng và có thể được quan sát rõ ràng.

Do đó, nhuộm màu là một phương pháp truyền màu cho các vi sinh vật trong suốt không màu với sự trợ giúp của các loại thuốc nhuộm sinh học khác nhau được gọi là 'vết bẩn' để quan sát bằng kính hiển vi.

Hóa học của vết bẩn:

Chất tạo màu có ba loại như sau:

1. Thuốc nhuộm:

Chúng được sử dụng cho màu mục đích chung như, để tô màu các vật liệu dệt và cho màu tường.

2. Vết bẩn:

Chúng được sử dụng để tô màu mẫu vật sinh học hoặc vi sinh. Đây là chính xác và chính xác hơn.

3. Các chỉ số:

Chúng là các hóa chất, thay đổi màu sắc với sự thay đổi nồng độ ion hydro (pH).

Mặc dù 'vết bẩn' là thuật ngữ thích hợp, thuật ngữ 'thuốc nhuộm' được sử dụng rộng rãi trong vi sinh học có nghĩa là các chất tạo màu. Trong quá khứ, thuốc nhuộm tự nhiên được điều chế từ các loại cây khác nhau. Chúng đã được thay thế rộng rãi bằng thuốc nhuộm tổng hợp.

Vì thuốc nhuộm tổng hợp đầu tiên được điều chế từ anilin, tất cả các thuốc nhuộm tổng hợp được gọi là "thuốc nhuộm anilin". Tuy nhiên, hầu hết các loại thuốc nhuộm này hiện được sản xuất từ than đá mà ngày nay chúng được gọi là "thuốc nhuộm than đá". Các thuốc nhuộm than đá là dẫn xuất benzen. Một phân tử thuốc nhuộm bao gồm ba thành phần (Hình 5.4) như được đưa ra dưới đây.

(a) Một vòng benzen

(b) Một nhóm nhiễm sắc thể

Benzen là một dung môi không màu hữu cơ, trong khi chromophore là thành phần tạo màu của thuốc nhuộm. Benzen kết hợp với chromophore để tạo thành nhiễm sắc thể (Hình 5.5). Vì nhiễm sắc thể không có đặc tính để phân tách, nó không thể kết hợp với các tế bào và bị cuốn trôi dễ dàng.

Khi một nhiễm sắc thể kết hợp với một đơn sắc, một thuốc nhuộm hoặc vết bẩn được hình thành. Các chất phụ trợ tạo ra tính chất phân ly điện phân (tính chất tạo muối) cho thuốc nhuộm. Do đó, về mặt hóa học, một vết bẩn được định nghĩa là một hợp chất hữu cơ có chứa vòng benzen, nhóm chromophore và nhóm bổ trợ.

Các loại nhuộm màu:

Nhuộm vi khuẩn có nhiều loại khác nhau như được mô tả dưới đây (Hình 5.6).

I. Nhuộm đơn giản:

Ở đây, chỉ có một vết được sử dụng. Nhuộm này được sử dụng để quan sát hình dạng (cocci, trực khuẩn, Vibrio, spirilli) và sự sắp xếp (đơn, cặp, tetrad, chuỗi, cụm) của vi khuẩn.

Nó có hai loại như sau:

A. Nhuộm cơ bản:

Trong nhuộm màu cơ bản, một vết bẩn cơ bản, như xanh methylen, tím pha lê hoặc carbol fuchsin, được sử dụng để nhuộm các tế bào vi khuẩn. Vết bẩn liên kết chặt chẽ với các tế bào vi khuẩn và tạo ra màu sắc sâu của vết bẩn cho các tế bào, trong khi môi trường xung quanh có màu sáng của vết bẩn.

B. Nhuộm axit:

Trong nhuộm màu axit, một vết axit, như eosin hoặc nigrosin, được sử dụng để nhuộm các tế bào vi khuẩn tiêu cực. Các vết bẩn làm cho xung quanh có màu, trong khi các tế bào vi khuẩn vẫn không màu.

II. Nhuộm màu khác biệt:

Ở đây, nhiều hơn một vết bẩn được sử dụng. Nó được thực hiện cho các mục đích sau.

A. Tách thành các nhóm:

Những phương pháp nhuộm vi sai này được thực hiện để phân biệt vi khuẩn thành các nhóm khác nhau dựa trên đặc điểm nhuộm màu của chúng.

Những phương pháp này bao gồm:

(a) Nhuộm Gram:

Phương pháp nhuộm này được thực hiện để phân biệt giữa vi khuẩn gram dương và gram âm.

(b) Nhuộm axit nhanh:

Nó được thực hiện để phân biệt giữa vi khuẩn axit nhanh và không axit nhanh.

B. Trực quan hóa cấu trúc cụ thể của vi khuẩn:

Những phương pháp nhuộm vi sai này được thực hiện để hình dung các thành phần cấu trúc cụ thể của tế bào vi khuẩn.

Những phương pháp này bao gồm: