Thử nghiệm cung cấp hydro trên vi khuẩn để tìm ra khả năng sản xuất hydro (có hình)

Đọc bài viết này để tìm hiểu về thử nghiệm cung cấp hydro trên vi khuẩn để tìm hiểu khả năng sản xuất hydro của chúng!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng khử lưu huỳnh thành hydro sunfua. Nó là một chất khí không màu, phản ứng với sắt (muối sắt) để tạo ra kết tủa đen của sunfua sắt.

Nó cũng phản ứng với chì acetate để tạo ra kết tủa chì đen sunfua. Thử nghiệm hydro sunfua (thử nghiệm H, S) có thể được thực hiện theo hai cách, dựa trên nguồn lưu huỳnh.

Chúng là như sau:

(tôi) Thử nghiệm H ₂ S sử dụng nguồn lưu huỳnh vô cơ

(ii) Thử nghiệm H ₂ S sử dụng nguồn lưu huỳnh hữu cơ

(i) Thử nghiệm H ₂ S sử dụng nguồn lưu huỳnh vô cơ:

Trong thử nghiệm này, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên môi trường thạch ba đường sắt (TSI agar slants), có chứa glucose, sucrose, lactose, phenol đỏ, natri thiosulphate và sắt sunfat. Nếu vi khuẩn sử dụng lưu huỳnh vô cơ (natri thiosulphate) được sử dụng trong môi trường, H ₂ S được tạo ra, kết hợp với sunfat sắt trong môi trường để tạo thành kết tủa đen của sunfua sắt dẫn đến thay đổi màu của mông thành màu đen .

Bên cạnh việc sử dụng lưu huỳnh vô cơ, nếu vi khuẩn có thể sử dụng bất kỳ loại nào trong ba loại đường (glucose, sucrose hoặc lactose), axit được tạo ra, làm giảm độ pH của môi trường. Kết quả là màu của xiên chuyển từ đỏ sang vàng.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, kim tiêm, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, môi trường thạch ba đường (môi trường thạch TSI) hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường thạch TSI (chứa 3 loại đường và sắt là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml lắc và xoáy (Hình 7.13).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7.4 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

3. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

4. Trước khi nó đông cứng, môi trường trong điều kiện nóng chảy ấm được phân phối vào 5 ống nghiệm (mỗi ống khoảng 20 ml).

5. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Chúng được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và giữ ở vị trí xiên để làm mát và hóa rắn môi trường, để có được môi trường thạch TSI.

8. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào các khe bằng cách đâm vào mông và vệt trên bề mặt của xiên với sự trợ giúp của kim khử trùng ngọn lửa. Kim được khử trùng sau mỗi lần tiêm.

9. Các xiên cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong tủ ấm.

Quan sát:

1. Màu của mông chuyển sang màu đen: H ₂ S dương tính.

2. Màu mông không đổi thành màu đen: H ₂ S âm tính.

(ii) Thử nghiệm H ₂ S sử dụng nguồn lưu huỳnh hữu cơ

Trong thử nghiệm này, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong nước dùng cystein, có chứa cysteine là nguồn lưu huỳnh hữu cơ. Nếu vi khuẩn sử dụng lưu huỳnh hữu cơ (cystein) được sử dụng trong môi trường với sự trợ giúp của enzyme 'cysteine desulphurase', H ₂ S được tạo ra. H ₂ S này kết hợp với chì axetat ngâm trong giấy tạo thành kết tủa chì đen sunfua dẫn đến thay đổi màu của dải giấy thành màu đen.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước canh cysteine, dải giấy lọc Whatman, dung dịch chì acetate (bão hòa), khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường nước canh cysteine (chứa cysteine là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay ( Hình 7.14).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 5 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối thành năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 10 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

4. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

5. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

6. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

7. Một dải giấy nhỏ ngâm trong dung dịch chì acetate (bão hòa) được cố định ở miệng của mỗi ống nghiệm sao cho một phần dài của nó nằm trong ống nghiệm và một phần nhỏ vẫn ở bên ngoài.

8. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 48 giờ trong tủ ấm.