Thử nghiệm khử nitrat trên vi khuẩn để tìm ra khả năng giảm nitrat

Đọc bài viết này để tìm hiểu về hiệu suất của thử nghiệm khử nitrat trên vi khuẩn để tìm hiểu khả năng giảm nitrat của chúng!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng làm giảm nitrat, vì chúng có thể tạo ra enzyme 'nitrate reductase'.

Enzyme này, với sự có mặt của nhà tài trợ điện tử phù hợp, làm giảm nitrat (N0 ₃ ^- ) thành nitrit (N0 ₂ ^- ). Sự hiện diện của N0 ₂ ^- được chỉ định bởi axit sulphanilic và a-naphthylamine, làm thay đổi màu thành màu đỏ.

Trong thử nghiệm khử nitrat, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong môi trường nước canh có chứa nitrat (N0 ₃ ^- ). Nếu vi khuẩn có khả năng làm giảm nitrat, nước dùng sẽ có màu đỏ khi thêm axit sulphanilic và a-naphthylamine.

Nếu màu đỏ không được tạo ra, nó chỉ ra rằng N0 ₃ ^{- hoàn toàn} không bị vi khuẩn hoặc vi khuẩn sản xuất enzyme khử nitrat mạnh, làm giảm nhanh N0 ₃ ^- vượt N0 ₂ ^- thành NH ₃ và N ₂ . Để xác nhận điều này, một lượng nhỏ bụi kẽm được thêm vào, làm giảm NO ₃ ^-, nếu có trong môi trường, đến N0 ₂ ^-, do đó tạo ra màu đỏ.

Do đó, nếu màu đỏ được tạo ra, nó chỉ ra rằng N0 ₃ ^- hiện diện trong môi trường không thay đổi và vi khuẩn không có khả năng khử nitrat. Nếu màu đỏ không được tạo ra, nó chỉ ra rằng, N0 ₃ ^- đã bị giảm quá N0 ₂ ^- thành NH ₃ và N ₂ và vi khuẩn có khả năng giảm nitrat.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước nitrat, bụi kẽm, thuốc thử nitrat Dung dịch A, dung dịch thuốc thử nitrat

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường canh nitrat (có chứa nitrat là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay ( Hình 7.10).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối thành năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 10 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

4. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

5. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

6. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

7. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 48 giờ trong tủ ấm.

8. 0, 5 ml mỗi dung dịch thuốc thử nitrat A (chứa axit sulphanilic) và dung dịch thuốc thử nitrat B (chứa a-naphthylamine) được thêm vào mỗi ống nghiệm, lắc đều và quan sát thấy sự thay đổi màu sau 15 phút.