Thử nghiệm Oxidase trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân Gelatin của chúng bằng cách sản xuất Gelatinase

Thử nghiệm Oxidase trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân Gelatin của chúng bằng cách sản xuất Gelatinase!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng thủy phân gelatin, vì chúng có thể tạo ra enzyme phân giải protein 'gelatinase'.

Trong khi gelatin bị kết tủa bởi clorua thủy ngân tạo ra độ trong mờ, các sản phẩm cuối cùng bị thủy phân không bị kết tủa bởi clorua thủy ngân, do đó chúng không tạo ra độ mờ như vậy, mà tạo ra độ trong suốt.

Trong thử nghiệm gelatin hóa, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên các đĩa thạch có chứa gelatin. Sau khi các khuẩn lạc của vi khuẩn được nhìn thấy, các tấm được ngập trong dung dịch clorua thủy ngân. Nếu vi khuẩn có khả năng thủy phân gelatin, các khuẩn lạc của nó sẽ thủy phân gelatin trong môi trường xung quanh chúng, trong khi phần còn lại của các mảng giữ lại gelatin không được thủy phân.

Kết quả là, khi ngập trong dung dịch clorua thủy ngân, các vùng trong suốt được hình thành xung quanh các thuộc địa, vì các sản phẩm thủy phân được hình thành xung quanh chúng không tạo thành kết tủa với clorua thủy ngân. Mặt khác, phần còn lại của các mảng trở nên trong mờ, vì gelatin không được thủy phân trong các khu vực này tạo thành kết tủa với clorua thủy ngân.

Vật liệu thiết yếu:

Đĩa Petri, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, môi trường gelatin của Fraizer, dung dịch clorua thủy ngân, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Hai đĩa petri được làm sạch, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su (Hình 7.20). Bước này cũng như khử trùng các đĩa petri ở bước 6 được bỏ qua, nếu các đĩa petri tiệt trùng lò được sử dụng trực tiếp

2. Các thành phần của môi trường thạch gelatin của Fraizer (chứa gelatin là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay .

3. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

4. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

5. Bình được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Hai đĩa petri và bình nón chứa môi trường thạch gelatin của Fraizer được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và được làm mát trong một thời gian mà không cho phép môi trường hóa rắn. Làm mát môi trường ngăn chặn sự ngưng tụ và tích tụ các giọt nước bên trong các tấm. Nếu môi trường đã được chuẩn bị và hóa rắn trong quá trình bảo quản, nó phải được hóa lỏng bằng cách đun nóng cẩn thận cho đến khi nó tan chảy hoàn toàn.

8. Để chuẩn bị các đĩa thạch gelatin, trước khi môi trường thạch gelatin của Frazier được khử trùng nguội đi và đông cứng lại, trong điều kiện nóng chảy, nó được rót vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào hai đĩa petri đã khử trùng (khoảng 20 ml mỗi lần), vì vậy môi trường nóng chảy bao phủ hoàn toàn đáy của đĩa petri.

Sau đó, các tấm được phủ bằng nắp đậy của chúng và để nguội, để làm cứng môi trường trong đó. Hơi nước có thể ngưng tụ trên bề mặt bên trong của các tấm và nắp được bốc hơi bằng cách giữ các tấm và nắp đậy vị trí đảo ngược trong tủ ấm ở 37 ° C trong khoảng 1 giờ.

9. Mỗi tấm được đánh dấu ở phía dưới thành bốn phần tư.

10. Cấy vi khuẩn tại chỗ của vi khuẩn thử nghiệm được thực hiện một cách vô trùng, tốt nhất là bên trong buồng chảy tầng, ở trung tâm của mỗi quý bằng cách tạo một đốm (hoặc vết nhỏ) của vi khuẩn với sự trợ giúp của vòng khử trùng ngọn lửa. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

11. Các đĩa được cấy được ủ ở vị trí đảo ngược, từ trên xuống, ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong tủ ấm cho đến khi nhìn thấy các khuẩn lạc của vi khuẩn.

12. Các tấm được ngập trong dung dịch clorua thủy ngân (HgCl ₂ ).