Thử nghiệm oxy hóa-lên men trên vi khuẩn để tìm ra khả năng sử dụng Glucose của chúng (có hình)

Thử nghiệm oxy hóa-lên men trên vi khuẩn để tìm ra khả năng sử dụng glucose trên cơ thể (oxy hóa) hoặc yếm khí (lên men)!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose. Một số người trong số họ chỉ sử dụng nó khi có oxy (ox theo phương pháp hoặc thể dục nhịp điệu), trong khi những người khác, ngoài việc sử dụng thể dục nhịp điệu, còn có thể sử dụng nó khi không có oxy (lên men hoặc yếm khí).

Do đó, một vi khuẩn, có thể lên men glucose phải có khả năng oxy hóa nó, nhưng một vi khuẩn có khả năng oxy hóa glucose có thể không lên men nó. Nếu glucose được sử dụng theo bất kỳ cách nào, axit được tạo ra, làm giảm độ pH thay đổi màu của bromocresol tím từ tím sang vàng.

Trong thử nghiệm lên men oxy hóa (O / F Test), vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên không và yếm khí riêng biệt, trong các ống thạch semisolid có chứa glucose và bromocresol màu tím. Nếu vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose, màu của môi trường sẽ chuyển từ màu tím sang màu vàng. Nếu nó sử dụng glucose trên cơ thể, nó là chất oxy hóa và nếu nó sử dụng glucose yếm khí, nó là lên men.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước canh glucose Hugh-Leif-son, parafin lỏng, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường nước canh glucose Hugh-Leifson (HLGB) (chứa glucose và bromocresol tím là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong một Bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy (Hình 7.9).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7.4 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

3. Sau khi điều chỉnh pH, agar được thêm vào. Ít agar được sử dụng ở đây để có được một môi trường semisolid, để tạo điều kiện cho đâm.

4. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

5. Trước khi nó đông cứng, môi trường trong điều kiện nóng chảy ấm được phân phối thành hai bộ ống nghiệm (mỗi ống khoảng 5 ml); mỗi bộ có năm ống nghiệm.

6. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

7. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

8. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

9. Parafin lỏng được khử trùng bằng cách làm nóng ở 180 ° C trong 3 giờ trong lò không khí nóng.

10. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng dòng chảy tầng, vào tất cả các ống canh semisolid đã khử trùng bằng cách đâm với sự trợ giúp của vòng tiêm chủng khử trùng bằng ngọn lửa. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

11. Parafin lỏng đã khử trùng được nhẹ nhàng đổ vô trùng vào một bộ ống tiêm, (cao khoảng 1 cm trên môi trường) để cung cấp điều kiện yếm khí.

12. Tất cả các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong tủ ấm.