Ghi chú nghiên cứu về hình học dòng chảy nâng cao

Bài viết được đề cập dưới đây cung cấp các ghi chú nghiên cứu về tế bào học dòng chảy trước.

Dòng tế bào học là kỹ thuật gần đây được phát triển trong hai thập kỷ qua để nghiên cứu nội dung tế bào đặc biệt là hiệu quả đóng gói hạt nhân. Ngoài NPE, các đặc tính vật lý và hóa học của nội dung của các tế bào và điều kiện bệnh lý khác nhau có thể được phân tích nhanh chóng với kết luận chính xác.

Các tế bào đo lưu lượng có sẵn trên thị trường ở dạng máy. Máy bao gồm hệ thống chất lỏng, một hệ thống quang học để thu thập các tín hiệu ánh sáng được tạo ra khi các tế bào đi qua tia laser. Máy cũng được cung cấp hệ thống điện tử giúp chuyển đổi tín hiệu ánh sáng thành tín hiệu điện tử tỷ lệ cuối cùng được số hóa để phân tích máy tính.

Khoảng 5000 tế bào mỗi giây, đo từng cái một, từ việc đình chỉ quần thể không đồng nhất có thể được quét.

Hệ thống Fludics được thiết kế tinh vi được cung cấp với laser, quang học, điện tử và phân loại. Hệ thống Fludics có Bộ phân loại tế bào được kích hoạt bằng huỳnh quang (hệ thống chất lỏng FACS Calibur), trong quá trình sắp xếp nó có thể sắp xếp độ chính xác của số lượng tế bào.

Kết quả là độ tinh khiết cao với sự phục hồi nằm giữa Single cell và Recovery. Nó được điều khiển điện tử với ba nút để chọn chế độ hoạt động PRIME, STAND BY và RUN. Tỷ lệ được kiểm soát là Cao; (60ul / phút), trung bình (35 ul / phút) và Thấp (12 ul / phút).

Kích thích và phát xạ, fluorochromes, bộ lọc và bù màu là phần quan trọng của thiết bị. Bộ lọc 530/30 đo các tín hiệu phát ra từ huỳnh quang Isothiocyanate (Stain). Nếu Phycoerythrin và Popidium Iodide được sử dụng thì bộ lọc BP 585/42 được sử dụng. Bộ lọc 650 LP được sử dụng nếu Peridinin Chất diệp lục và Tín hiệu 7-Amino-Actinomycin D được tạo ra.

Các tín hiệu laser được đọc bởi phần mềm tìm kiếm tế bào Becton Dickinson. Bộ phát hiện và bộ lọc dải phải được điều chỉnh theo hướng dẫn và yêu cầu của thiết bị. Nguồn sáng laser Argon 488nm và bộ lọc thông dải 623nm thường có trong thiết bị.

Nó cũng có hệ thống để hiển thị dữ liệu và phân tích. Các tham số quan trọng là biểu đồ, dữ liệu đa tham số, và dữ liệu chế độ danh sách và gating. Máy phân tích dữ liệu với sự trợ giúp của phần mềm được cung cấp và đưa ra biểu đồ của nội dung DNA so với số lượng được hiển thị trên máy tính tự động (49.2).

Các ứng dụng của máy đo lưu lượng dòng chảy rất nhiều và là một lợi ích cho nghiên cứu sinh học và cho các nghiên cứu lâm sàng trong nhiều bệnh ở người. Dòng tế bào học được sử dụng để nghiên cứu các dòng máu trong mô hemopoitic trong các tế bào thận đầu của cá thở không khí.

Có thể dễ dàng phân biệt giữa tế bào gốc tạo máu đa năng và kiểu hình của quần thể tế bào lympho ngoại vi trưởng thành. Việc sử dụng đáng kể của thiết bị này là để nghiên cứu apoptosis hoặc chết tế bào và cũng để nghiên cứu sự hoại tử của tế bào do độc tính của thuốc trừ sâu.

Do tín hiệu phân tán góc rộng, có thể phân giải tế bào lympho, bạch cầu đơn nhân và bạch cầu hạt từ mẫu máu toàn phần bị ly giải. Cũng có thể tách tiểu cầu khỏi tiếng ồn nền. Nó được sử dụng cho hệ thống miễn dịch và trong mô hình miễn dịch. Nó được sử dụng để nghiên cứu bệnh bạch cầu và ung thư hạch, nghiên cứu cấy ghép, liệt kê hồng cầu lưới và phân tích nội dung DNA của tế bào.

Do cơ chế xử lý xung, thuận lợi trong phân tích chu trình tế bào DNA. Phân tích NPE được sử dụng để phân biệt ung thư vú nguyên phát và di căn, ung thư đại tràng nguyên phát và di căn đại tràng cũng như ung thư dạ dày và buồng trứng (Hình 49.2).

Giao thức được sử dụng là các tế bào đầu tiên đã được loại bỏ và cố định trong 3% paraformaldehyd. Chúng được thẩm thấu với 0, 5% Triton x 100. DNA hạt nhân sau đó được dán nhãn bằng popidium iodide sau khi xử lý RNase bằng bộ DNA Test Plus chu kỳ.