Thử nghiệm sắt ba đường trên vi khuẩn để tìm ra khả năng sản xuất hydro sunfua (có hình)
Đọc bài viết này để tìm hiểu về thử nghiệm sắt ba đường trên Vi khuẩn để tìm ra khả năng sản xuất Hydrogen Sulphide!
Nhằm thực hiện thử nghiệm sắt ba đường (xét nghiệm TSI), để tìm ra khả năng vi khuẩn sử dụng bất kỳ một hoặc ba loại đường nào, chẳng hạn như glucose, sucrose và lactose cũng như khả năng sản xuất hydro sunfua (H 2 S), làm giảm sắt.
Nguyên tắc:
Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng một hoặc nhiều trong số ba loại đường như glucose, sucrose và lactose.
Nếu sử dụng bất kỳ một hoặc nhiều trong ba loại đường (ba loại đường), axit sẽ được tạo ra, làm giảm độ pH thay đổi màu của phenol đỏ từ đỏ sang vàng.
Hơn nữa, một số vi khuẩn có khả năng sản xuất hydro sunfua (H 2 S) bằng cách sử dụng các hợp chất lưu huỳnh. H 2 S được sản xuất kết hợp với hợp chất sắt, sunfat sắt, tạo thành kết tủa đen của sunfua sắt.
Trong thử nghiệm sắt ba đường (xét nghiệm TSI), vi khuẩn thử nghiệm được phát triển trên môi trường thạch có chứa glucose, sucrose, lactose, phenol đỏ, natri thiosulphate và sắt sunfat. Trong khi môi trường chứa glucose (tức là D-glucose hoặc dextrose) ở nồng độ thấp 0, 1%, nồng độ sucrose và lactose được giữ ở mức cao 1%.
Nếu vi khuẩn có khả năng sử dụng bất kỳ một hoặc nhiều trong ba loại đường, màu của môi trường sẽ chuyển từ đỏ sang vàng. Nếu vi khuẩn có khả năng tạo ra H 2 S, môi trường thu được màu đen. Vì ba loại đường và một hợp chất sắt được sử dụng trong môi trường, thử nghiệm được gọi là thử nghiệm sắt ba đường.
Vật liệu thiết yếu:
Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, kim tiêm, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, thạch ba đường (TSI), khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.
Thủ tục:
1. Các thành phần của môi trường thạch TSI (chứa 3 loại đường và sắt là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml lắc và xoáy (Hình 7.7).
2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7.4 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.
3. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.
4. Trước khi nó đông cứng, môi trường trong điều kiện nóng chảy ấm được phân phối vào 5 ống nghiệm (mỗi ống khoảng 20 ml).
5. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.
6. Chúng được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.
7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và giữ ở vị trí xiên để làm mát và hóa rắn môi trường, để có được môi trường thạch TSI.
8. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào các khe bằng cách đâm vào mông và vệt trên bề mặt của xiên với sự trợ giúp của kim khử trùng ngọn lửa. Kim được khử trùng sau mỗi lần tiêm.
9. Các xiên cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong tủ ấm.
Quan sát:
1. Mông vàng và xiên đỏ có hoặc không có khí sản xuất (vỡ ở mông agar):
Axit mông và kiềm nghiêng đã được hình thành. Ở đây chỉ có glucose đã được sử dụng yếm khí (lên men) làm cho mông có tính axit (màu vàng). Không có đường khác đã được sử dụng. Vì nồng độ glucose ít hơn (0, 1%), một lượng nhỏ axit được tạo ra trên bề mặt nghiêng bị oxy hóa nhanh chóng làm cho nó có tính kiềm (màu đỏ).
Hơn nữa, sự thống trị oxy hóa của peptone có trong môi trường tạo ra NH Y làm cho xiên kiềm (màu đỏ). Tuy nhiên, ở mông, tình trạng axit được duy trì do giảm oxy và vi khuẩn phát triển chậm hơn. Do đó, vi khuẩn là glucose dương tính.
2. Mông vàng và xiên vàng có hoặc không có khí sản xuất:
Axit mông và axit xiên đã được hình thành. Ở đây, đường sữa và / hoặc sucrose đã được lên men. Vì nồng độ của chúng trong môi trường cao, chúng tạo ra một lượng lớn axit dẫn đến axit có tính axit và mông axit và duy trì tình trạng axit. Do đó, vi khuẩn là sucrose / lactose dương tính.
3. Mông đỏ và xiên đỏ:
Không ai trong số ba loại đường đã được lên men. Thay vào đó, pepton đã bị dị hóa trong điều kiện yếm khí và / hoặc hiếu khí, dẫn đến tình trạng kiềm do sản xuất amoniac.
Nếu chỉ có sự thoái hóa hiếu khí của pepton xảy ra, chỉ có bề mặt nghiêng trở nên kiềm (màu đỏ). Nếu có sự phân hủy hiếu khí và kỵ khí của peptone, cả phần nghiêng cũng như mông đều trở nên kiềm (màu đỏ). Do đó, vi khuẩn là đường âm tính.
4. Làm đen mông:
Ngoài bất kỳ một trong những điều kiện trên, nếu xảy ra hiện tượng đen mông, điều đó cho thấy rằng, vi khuẩn có khả năng tạo ra H 2 S sử dụng lưu huỳnh vô cơ (natri thiosulphate) có trong môi trường.
H 2 S kết hợp với sunfat sắt trong môi trường để tạo thành kết tủa đen của sunfua sắt dẫn đến sự thay đổi màu của môi trường sang màu đen. Do đó, vi khuẩn có H 2 S dương tính.
5. Không làm đen mông:
Vi khuẩn không có khả năng tạo ra H 2 S sử dụng lưu huỳnh vô cơ (natri thiosulphate) có trong môi trường. Do đó, vi khuẩn là H 2 S âm tính.
