Thử nghiệm mỡ trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân Urê (Có hình)

Thử nghiệm mỡ trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân Urê (Có hình)!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng thủy phân (phân hủy khi có nước) urê thành NH ₃ và CO ₂, vì chúng có thể tạo ra enzyme 'urease'.

NH ₃ có tính kiềm (cơ bản), do đó, nó làm tăng độ pH thay đổi màu của phenol đỏ từ vàng sang hồng.

Trong thử nghiệm urease, vi khuẩn thử nghiệm được phát triển trên môi trường thạch có chứa urê và phenol đỏ. Nếu vi khuẩn có khả năng thủy phân urê, màu của môi trường chuyển từ vàng sang hồng. Một số vi khuẩn có thể tạo ra NH ₃ bằng cách phá vỡ pepton trong môi trường. Trong trường hợp như vậy kết quả dương tính giả thu được.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, kim tiêm, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, thiết bị lọc màng, môi trường urê, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Năm ống nghiệm được cắm bằng bông, được phủ bằng giấy thủ công và được buộc bằng chỉ hoặc dây cao su (Hình 7.15).

2. Các thành phần của môi trường urê agar (chứa urê là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn (trừ urê) cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 90 ml nước cất trong bình nón 250 ml run rẩy và xoáy.

3. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 6, 9 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

4. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

5. Bình được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Năm ống nghiệm và bình nón chứa agar agar (trừ urê) được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và được làm mát trong một thời gian mà không cho phép môi trường hóa rắn. Làm mát môi trường ngăn chặn sự ngưng tụ và tích tụ các giọt nước trên môi trường. Nếu môi trường đã được chuẩn bị và hóa rắn trong quá trình bảo quản, nó phải được hóa lỏng bằng cách đun nóng cẩn thận cho đến khi nó tan chảy hoàn toàn.

8. Dung dịch urê 20% được điều chế bằng cách hòa tan 20 gram urê trong 100 ml nước cất và được khử trùng bằng thiết bị lọc màng, vì urê không thể được khử trùng bằng nhiệt, vì nó bị phân hủy khi đun nóng.

9. 10 ml dung dịch urê tiệt trùng được trộn kỹ vô trùng với 90 ml môi trường hóa lỏng được làm mát đã khử trùng (hóa lỏng bằng cách đun nóng).

10. Trước khi nó đông cứng, môi trường, trong điều kiện nóng chảy ấm, được phân phối vô trùng vào 5 ống nghiệm tiệt trùng cắm bông (mỗi ống khoảng 20 ml).

11. Các ống nghiệm được giữ ở vị trí nghiêng để làm mát và hóa rắn môi trường, để có được môi trường thạch urê.

12. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào các khe bằng cách đâm vào mông và vệt trên bề mặt của xiên với sự trợ giúp của kim khử trùng ngọn lửa. Kim được khử trùng sau mỗi lần tiêm.

13. Các xiên cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong tủ ấm.