Thí nghiệm Voges-Proskauer về vi khuẩn để tìm khả năng sử dụng Glucose (có hình)

Đọc bài viết này để tìm hiểu về thử nghiệm Voges-Proskauer (thử nghiệm VP) trên vi khuẩn để tìm hiểu khả năng sử dụng glucose của chúng với việc sản xuất acetylmethylcarbinol!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose và chuyển đổi nó thành acetylmethylcarbinol (acetoin), là một sản phẩm cuối trung tính.

Những vi khuẩn này ban đầu chuyển hóa glucose thành axit pyruvic, được chuyển hóa thêm qua axit axetic trung gian chuyển hóa thành acetylmethylcarbinol (acetoin) và C0 ₂ thông qua con đường 'butylene glycol'.

Acetylmethylcarbinol bị oxy hóa thành diacetyl khi có a-naphthol trong điều kiện kiềm (40% KOH). Diacetyl phản ứng với nhóm creatine guanidine (từ peptone được sử dụng trong môi trường nuôi cấy) để tạo ra màu hồng hồng.

Trong thử nghiệm Voges-Proskauer (thử nghiệm VP), vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong môi trường nước canh có chứa glucose. Nếu vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose với việc sản xuất acetylmethylcarbinol (acetoin) làm sản phẩm cuối trung tính, thì nước dùng thu được màu hồng hồng khi thêm dung dịch a-naphthol sau đó là 40% KOH.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước canh MR-VP (hoặc nước dùng glucose phosphate), dung dịch VP I (dung dịch thuốc thử Barritt A) và dung dịch VP II (Dung dịch thuốc thử B của Barritt), các khuẩn lạc phân lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn nguyên chất.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường canh MR-VP (chứa glucose là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy (Hình 7.5). Nước dùng được sử dụng cho thử nghiệm đỏ methyl cũng có thể được sử dụng ở đây. Thông thường, cùng một nước dùng được sử dụng cho cả hai xét nghiệm (MR và VP) cùng một lúc.

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 6, 9 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối thành năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 10 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

4. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

5. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

6. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

7. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 48 đến 72 giờ trong tủ ấm.

8. Dung dịch VP I (chứa α-naphthol) được thả vào các ống canh (mỗi ống 0, 2 ml) và trộn kỹ.

9. Dung dịch VP II (chứa KOH) được thả vào các ống canh (mỗi ống 0, 6 ml), trộn kỹ và để yên trong 30 phút đến 2 giờ.