Bảo quản lạnh giao tử ở cá
Trong bài viết này, chúng tôi sẽ thảo luận về bảo quản lạnh của giao tử ở cá.
Bảo quản lạnh là một kỹ thuật lưu trữ với thực tế không giới hạn thời gian. Bảo quản giao tử cá đã được thử với kỹ thuật này. Bảo quản lạnh tinh trùng là một quy trình được thiết lập tốt trong chăn nuôi.
Bây giờ tinh trùng được bảo quản lạnh được sử dụng thành công trong việc thụ tinh gia súc, ngựa, lợn, cừu và gia cầm. Thật thú vị khi lưu ý rằng những nỗ lực lớn đã được đưa vào để chuyển giao công nghệ này để bảo quản tinh trùng, ova và phôi cá.
Kỹ thuật này sẽ giúp người nuôi cá theo những cách sau:
(1) Vấn đề trưởng thành không trùng hợp của nam và nữ có thể khắc phục, nếu tinh trùng hoặc ova được giữ trong kho.
(2) Chương trình nhân giống chọn lọc có thể được thực hiện nhằm cải thiện nguồn gốc bản địa và sẽ giúp thế giới thứ ba nhân giống các loài bản địa của chúng và tạo ra các chủng đặc biệt của thân cây cao cấp.
(3) Kỹ thuật bảo quản lạnh của giao tử sẽ đóng một vai trò quan trọng trong việc bảo tồn tế bào mầm bản địa vì nhiều loài cá bản địa Ấn Độ không thể cạnh tranh với các loài cá kỳ lạ. Bằng kỹ thuật này, các giao tử từ các loài bị đe dọa được đánh dấu như một hàng rào chống lại sự biến đổi di truyền đang suy giảm do các xáo trộn môi trường.
(4) Nó có thể giúp sản xuất văn hóa đơn giới.
(5) Nếu giao tử có thể được bảo tồn thành công, chúng ta có thể phát triển cá trong suốt cả năm theo yêu cầu của chúng tôi và có thể giúp thành lập ngân hàng gen để bảo tồn nguồn gốc di truyền của quần thể và giữ chúng để giới thiệu lại khi điều kiện sống sót được cải thiện.
Các tinh trùng, trứng và phôi có thể được bảo quản lạnh, nhưng việc bảo quản trứng và phôi rất khó khăn vì không có chất bảo quản lạnh để được hấp thụ đủ trong các tế bào này vì kích thước lớn so với tinh trùng.
Việc bảo quản lạnh tinh trùng ở cá là thành công ở người; Các loài Những loài này là Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius và DETinus Carpio, Serothodon mossambicus; Labeo rohita, Catla catla và Cirrhinus mrigala.
Các bước sau đây cần được tuân thủ trong việc bảo quản tinh trùng:
(1) Bộ sưu tập của milt (tinh dịch).
(2) Chuẩn bị dung dịch mở rộng.
(3) Lựa chọn chất bảo vệ lạnh.
(4) Đóng băng.
(5) Thành công khi thụ tinh.
Bộ sưu tập của Milt:
Bước đầu tiên là thu thập tinh trùng. Thông thường các tinh trùng được thu thập từ các loài cá khỏe mạnh bằng phương pháp tước. Ống thông có thể được sử dụng, đó là cách thay thế tốt hơn để tước. Những con đực bố mẹ có đặc điểm tốt nhất được chọn và rửa bằng dung dịch Ringers và vùng nhú sinh dục được làm khô.
Người môi giới có thể được gây mê hoặc không gây mê. Thuốc gây mê thường được sử dụng là 0, 3 ml / l phenoxyethanol. Theo Kumar (1989), tiêm suston 250 (organon) trước khi tước cho kết quả tốt hơn ở cá chép Ấn Độ. Đa số công nhân trong lĩnh vực này đã khuyến nghị các loài cá không gây mê để tước để lấy milt.
Các milt được thu thập trong ống tiêm hoặc ống tan máu và sau đó được bảo quản trong các ống thủy tinh (niêm phong hoặc không niêm phong), ống hút nhựa và thường trong túi nhựa. Màu sắc, khối lượng, mật độ, độ pH và khả năng vận động của tinh trùng sẽ được chú ý.
Mẫu phải không có chất tiết niệu và phân. Một mẫu thử sẽ được kiểm tra dưới kính hiển vi để nhận thấy sự bất thường ở tinh trùng. Nếu mẫu là OK, sau đó đưa vào xử lý tiếp, nếu không mẫu mới từ người nuôi dưỡng mới có thể được lấy.
Trong thời gian thu thập và bảo quản tinh trùng, ống tiêm / ống tiêm / ống hút có thể được giữ trong nước ao để duy trì nhiệt độ không đổi. Legendary và Billard (1980) thu thập tinh trùng trong các ống tan máu trong băng tan và sau đó được lưu trữ trên bề mặt lạnh ở 4 ° C.
Việc chuẩn bị và lựa chọn bộ mở rộng, một giải pháp trong đó milt được thu thập, là quan trọng nhất để bảo quản lạnh. Bộ mở rộng ngăn ngừa sự cạn kiệt năng lượng tinh trùng và duy trì tinh trùng trong điều kiện quisis nhưng còn sống.
Có hai phần mở rộng cơ bản. Chúng được gọi là môi trường Mounibs (M) và môi trường Menezo (Me). Trong hai phương tiện truyền thông serun albumin (BSA) và lòng đỏ trứng Tellurite được thêm vào. Đối với cá Ấn Độ, một số bộ mở rộng đã được thử bằng cách sửa đổi các thành phần sau đây của chúng.
Thành phần phổ biến là natri clorua, KCI, CaCl2, NaHCO 3, Na 2 HPO 4 và MgSO4. Ngoài ra, các chất dinh dưỡng & glycine cũng được thêm vào để cải thiện bảo quản lạnh. Thuốc kháng sinh như gentomycin hoặc streptomycin cũng được thêm vào dung dịch mở rộng nếu cần.
Chất bảo quản lạnh:
Chức năng chính của chất bảo vệ lạnh là thâm nhập vào tế bào và có thể giúp tinh trùng chịu được nhiệt độ đóng băng. Quan trọng nhất và được sử dụng rộng rãi là DSMO (Dimethyl sulfoxide) và glycerol. Harvey (1983) đã sử dụng methanol, DSMO và glycerol kết hợp với sữa bột hoặc lòng đỏ trứng.
Dung dịch bảo quản lạnh và dung dịch mở rộng theo tỷ lệ cố định, thường là một phần của chất bảo quản lạnh và chín phần của dung dịch mở rộng được gọi là chất pha loãng. Trong chất pha loãng này, các tinh trùng được thu thập để xử lý tiếp để đóng băng.
Chất pha loãng (cryoprotectant + extender + sperms) được lấy trong ống hút polyvinyl và cả hai đầu ống hút được niêm phong và bây giờ chúng đã sẵn sàng để đông lạnh hoặc làm lạnh. Máy nghiền có thể được làm lạnh, nhiệt độ được duy trì trong khoảng 0-5 o C. Trong khi ở trạng thái đóng băng, CO 2 và nitơ lỏng được sử dụng Bảo quản lạnh của máy teleost (0-50 o C) đã được nghiên cứu rộng rãi trong Salmonids.
Trong quy trình cấp đông, nhiều vấn đề như sốc lạnh, cần hình thành băng nội bào và sốc thẩm thấu. Bảo quản lạnh thường có nghĩa là lưu trữ các tế bào hoặc mô ở -196 o C, nhiệt độ của nitơ lỏng (Hình 22.1).
Tổn thương tế bào nên được kiểm soát. Ba loại tổn thương tế bào thường xảy ra. Đầu tiên là sốc lạnh, nguyên nhân là do làm mát trên nhiệt độ đóng băng. Điều này quan trọng hơn đối với ova, không quan trọng lắm đối với tinh trùng.
Điều này xảy ra lên đến 0 ° C. Khi nhiệt độ từ 0 ° C và-80 ° C, sốc thẩm thấu và hình thành băng nội bào trong ova và tinh trùng diễn ra. Để bảo quản lạnh thành công những điều này được kiểm soát.
Nói tóm lại, những ống hút chứa chất pha loãng, được chuyển thành ống khói. Các ống khói giữ ống hút sau khi cho phép thời gian cân bằng khác nhau được nhúng đầu tiên vào hơi nitơ lỏng và sau đó vào nitơ lỏng ở nhiệt độ -196 ° C. Legendra và Billard (1980) đã lưu trữ tinh trùng của cá hồi cầu vồng trong băng khô (CO 2 -79 ° C) hoặc trong nitơ lỏng lên đến 6 tháng.
Trong một số loài nước ngọt đóng băng đã được thực hiện bằng cách viên nén lơ lửng tinh trùng vào đá khô. Quá trình chuyển đổi từ 0 ° C đến -70 ° C kéo dài khoảng 2 phút dẫn đến tốc độ 35 o C / phút. Vì tốc độ giảm trên - 60 ° C. Các kết quả tốt nhất thu được trong nitơ lỏng.
Rã đông:
Sự tan băng là sự kiện đóng băng ngược. Làm tan băng được thực hiện trong bể nước ở nhiệt độ từ 10 ° C đến 60 ° C. Sự thành công của toàn bộ quy trình phụ thuộc vào khả năng vận động của tinh trùng và khả năng thụ tinh của ova.
Stoss và Holtz (1982) đã tăng khả năng vận động của tinh trùng cá hồi hồng từ 30 giây lên 10 phút bằng cách kích hoạt với dung dịch NaHCO 3 120nm, trong đó thêm 1 BMX (3-isobutyl-1-methyl xanthium). Kumar (1989) tuyên bố rằng thời gian lưu trữ là khoảng 20 ngày ở L. rohita và H. molitrix trong điều kiện đông lạnh.
Trứng của Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch và O.keta đã được cố định bằng cách loại bỏ thông qua quá trình tước và niêm phong trong túi nhựa cùng với chất lỏng coelomic và giữ trong oxy ở 1 ° C. Trứng sau đó được cho phép lan rộng để tạo thành một hoặc hai lớp trứng sâu.
Trứng sau đó trộn với dung dịch mở rộng và bảo vệ lạnh gần như theo cách tương tự như được mô tả trước đó cho tinh trùng. Theo Harvey và Kelley (1984), việc lưu trữ ova không đông lạnh (ướp lạnh) đã thành công vừa phải trong cá hồi, với thời gian lưu trữ theo thứ tự vài tuần thu được thông qua việc làm lạnh trứng oxy trong chất lỏng coelomic.
