Thử nghiệm thủy phân lipid trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân lipid (có hình)

Đọc bài viết này để tìm hiểu về xét nghiệm thủy phân lipid, để tìm hiểu khả năng của vi khuẩn để thủy phân lipid (chất béo)!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng thủy phân lipit (chất béo) thành glycerol và axit béo, vì chúng sở hữu enzyme lipolytic 'lipase'.

Những vi khuẩn này được gọi là vi khuẩn lipolytic. Trong khi lipit tạo thành một nhũ tương, khi được phân phối trong môi trường thạch, tạo ra độ mờ đục, các sản phẩm cuối cùng bị thủy phân, glycerol và axit béo, không tạo thành nhũ tương như vậy với agar, vì chúng không tạo ra độ mờ như vậy; thay vì sản xuất minh bạch.

Trong thử nghiệm thủy phân lipid, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên các đĩa thạch chứa Tributyrin làm chất nền lipid. Tributyrin tạo thành một nhũ tương, khi được phân phối trong môi trường thạch, tạo ra một môi trường mờ đục.

Nếu vi khuẩn có khả năng thủy phân lipit, các khuẩn lạc của nó thủy phân Tributyrin trong môi trường xung quanh chúng để hòa tan glycerol và axit béo (axit butyric), trong khi phần còn lại của các mảng chứa Tributyrin không được thủy phân.

Do đó, các vùng trong suốt được hình thành xung quanh các khuẩn lạc, vì các sản phẩm thủy phân, glycerol và axit béo, được hình thành xung quanh chúng không tạo thành nhũ tương với môi trường thạch. Mặt khác, phần còn lại của các mảng vẫn mờ đục, vì Tributyrin không được thủy phân trong các khu vực này tạo thành một nhũ tương với môi trường thạch.

Vật liệu thiết yếu:

Đĩa Petri, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, agarrin agar, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Hai đĩa petri được làm sạch, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su (Hình 7.22). Bước này cũng như khử trùng các đĩa petri ở bước 6 được bỏ qua, nếu các đĩa petri tiệt trùng bằng lò được sử dụng trực tiếp.

2. Các thành phần của môi trường thạch Tributyrin (không bao gồm Tributyrin, là thành phần lipid) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy.

3. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

4. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

5. Sau khi làm mát đến khoảng 90 ° C, Tributyrin được thêm vào và nhũ hóa trong máy xay sinh tố Warring.

6. Bình được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

7. Hai đĩa petri và bình nón chứa môi trường thạch Tributyrin được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

8. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và để nguội một thời gian, không cho phép môi trường đông đặc. Làm mát môi trường ngăn chặn sự ngưng tụ và tích tụ các giọt nước bên trong các tấm. Nếu môi trường đã được chuẩn bị và hóa rắn trong quá trình bảo quản, nó phải được hóa lỏng bằng cách đun nóng cẩn thận cho đến khi nó tan chảy hoàn toàn.

9. môi trường nóng chảy bao phủ hoàn toàn dưới cùng của đĩa petri.

Sau đó, các tấm được phủ bằng nắp đậy của chúng và để nguội, để làm cứng môi trường trong đó. Tributyrin tạo thành một nhũ tương, khi được phân phối trong môi trường thạch, tạo ra một môi trường mờ đục. Hơi nước có thể ngưng tụ trên bề mặt bên trong của các tấm và nắp được bốc hơi bằng cách giữ các tấm và nắp ở vị trí đảo ngược trong tủ ấm ở 37 ° C trong khoảng 1 giờ.

10. Mỗi tấm được đánh dấu ở phía dưới thành bốn phần tư.

11. Cấy vi khuẩn tại chỗ của vi khuẩn thử nghiệm được thực hiện một cách vô trùng, tốt nhất là bên trong buồng chảy tầng, ở trung tâm của mỗi quý bằng cách tạo một đốm (hoặc vết nhỏ) của vi khuẩn với sự trợ giúp của vòng khử trùng ngọn lửa. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

12. Các đĩa được cấy được ủ ở vị trí đảo ngược, từ trên xuống, ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong tủ ấm cho đến khi nhìn thấy các khuẩn lạc của vi khuẩn.