Bào tử bào tử vi khuẩn để phân biệt bào tử vi khuẩn và tế bào sinh dưỡng

Mục đích:

Tất cả các vi khuẩn vẫn ở trong 'dạng thực vật' của chúng, nếu điều kiện môi trường thuận lợi cho các hoạt động trao đổi chất thông thường của chúng.

Ở dạng này, chúng lấy chất dinh dưỡng, phát triển và sinh sản.

Mặt khác, hầu hết trong số họ chết, khi các điều kiện môi trường trở nên bất lợi, chẳng hạn như, lạnh nghiêm trọng, cực nóng, lão hóa, thiếu chất dinh dưỡng, tiếp xúc với bức xạ và hóa chất độc hại.

Tuy nhiên, rất ít loài vi khuẩn, có thể sống sót trong điều kiện bất lợi như vậy bằng cách thay đổi bản thân thành các dạng không hoạt động, có khả năng trao đổi chất cao gọi là 'bào tử'. Trong điều kiện bất lợi, một bào tử được tạo ra trong một tế bào sinh dưỡng do mất nước và co lại nội dung tế bào của nó.

Bào tử này, được hình thành bên trong tế bào vi khuẩn, được gọi là 'endospore' (Hình 2.13). Nếu các điều kiện bất lợi trở nên tồi tệ hơn, tế bào vỡ ra, giải phóng lớp nội nhũ, giờ trở thành một tế bào không hoạt động độc lập gọi là 'bào tử'.

Quá trình hình thành bào tử được gọi là "sinh bào tử". Bào tử có các lớp dày, tương đối không thấm nước, chẳng hạn như vỏ bào tử và áo bào tử, bảo vệ tế bào khỏi mọi thiệt hại vật lý. Các bào tử đạt được sức đề kháng của nó bằng một số cơ chế, chưa được giải thích rõ ràng.

Khi các điều kiện trở nên thuận lợi, các lớp bao phủ vỡ bào tử và bào tử tạo ra một tế bào sinh dưỡng hoạt động trao đổi chất. Quá trình này được gọi là "nảy mầm".

Do đó, dựa trên khả năng hình thành bào tử, vi khuẩn có thể được chia thành hai nhóm như sau:

(1) Vi khuẩn hình thành bào tử (bào tử bào tử):

Một loại vi khuẩn, có thể tạo ra bào tử để tồn tại trong điều kiện môi trường bất lợi là vi khuẩn hình thành bào tử (bào tử trước đây). Hầu hết, ba chi sau đây của vi khuẩn hình que có thể tạo ra bào tử trong điều kiện môi trường bất lợi.

A. Vi khuẩn hình que hiếu khí

1. Bacillus spp.

B. Vi khuẩn hình que kỵ khí

2. Clostridium spp.

3. Desulfotomaculum spp.

(2) Vi khuẩn không tạo bào tử (Không tạo bào tử):

Một loại vi khuẩn, không thể tạo ra bào tử và do đó, chết ở dạng thực vật trong điều kiện môi trường bất lợi, là vi khuẩn không hình thành bào tử (không phải là bào tử trước đây).

Mục đích của nhuộm bào tử là để phân biệt các bào tử và tế bào sinh dưỡng của một bào tử trước đây và để phân biệt các bào tử bào tử với các dạng không bào tử. Nhuộm bào tử cũng hữu ích trong việc xác định vi khuẩn thuộc chi Bacillus, Clostridium và Desulfotomaculum.

Nguyên tắc:

Các bào tử khác với các tế bào sinh dưỡng ở chỗ chúng sở hữu các lớp dày, tương đối không thấm nước xung quanh chúng (Hình 2.14). Các vết bẩn chính, màu xanh lá cây malachite, không thể xâm nhập vào các bào tử thông qua các lớp này.

Do đó, sự xâm nhập của vết bẩn chính được tăng cường nhờ ứng dụng nhiệt, đưa nó đi qua các lớp phủ vào nguyên sinh chất bào tử. Bây giờ, các bào tử xuất hiện màu xanh lá cây. Khi các bào tử được xử lý bằng chất khử màu, nước máy, chúng không trải qua quá trình khử màu, vì chúng loại trừ nước.

Nước máy chỉ loại bỏ các vết bẩn chính còn sót lại ở xung quanh các bào tử. Do đó, các bào tử giữ lại màu xanh lá cây. Sau đó, khi được nhuộm màu bằng safranin, các phân tử safranin không thể xâm nhập vào bào tử thông qua các lớp phủ. Do đó, cuối cùng các bào tử giữ lại màu xanh lục của vết bẩn chính và xuất hiện màu xanh lá cây.

Mặt khác, các tế bào vi khuẩn thực vật chiếm vết bẩn chính, màu xanh lá cây malachite, dễ dàng, nhưng vết bẩn không có ái lực mạnh đối với các thành phần tế bào thực vật, do nó bị cuốn trôi, khi bị mất màu dưới nước máy.

Bây giờ, các tế bào sinh dưỡng xuất hiện không màu. Khi được nhuộm màu bằng safranin, các tế bào thực vật không màu chiếm vết và xuất hiện màu đỏ không giống như các bào tử, xuất hiện màu xanh lá cây.

Vật liệu thiết yếu:

Trượt, vòng, màu xanh lá cây malachite, safranin, vi khuẩn hình thành bào tử, tấm nóng, kính hiển vi, dầu ngâm.

Thủ tục:

1. Một slide được làm sạch đúng cách dưới nước máy, sao cho nước không còn như giọt trên bề mặt của nó.

2. Nước kết dính được quét sạch bằng giấy thấm và slide được làm khô bằng không khí.

3. Một vệt vi khuẩn hình thành bào tử được tạo ra ở trung tâm của một slide theo hai phương pháp như được đưa ra dưới đây.

(a) Nếu quan sát thấy bào tử được trồng trên đĩa thạch hoặc xiên agar, một giọt nước được đặt ở trung tâm của slide. Một vòng lặp được khử trùng trên ngọn lửa và một vòng vi khuẩn Clostridium từ một đĩa già hoặc nuôi cấy xiên (48-72 giờ) của bào tử trước đây, chẳng hạn như siêu khuẩn Clostridium hoặc Bacillus subtilis được chuyển vào giọt nước.

Sau đó, bằng cách xoay nhẹ vòng lặp trong giọt nước, huyền phù vi khuẩn được tạo ra và giọt được lan truyền cho đến khi có được vết bẩn. Khi tuổi của vi khuẩn hình thành bào tử trên đĩa hoặc nuôi cấy xiên tăng lên, chúng tạo thành bào tử.

(b) Nếu quan sát thấy bào tử được nuôi cấy trong môi trường lỏng, thì môi trường nuôi cấy, chỉ chứa các tế bào sinh dưỡng, chịu áp lực nhiệt, bằng cách đun nóng trên bồn nước trong 15 phút, để một số tế bào thực vật hình thành bào tử để khắc phục stress nhiệt. Một giọt huyền phù tế bào sinh dưỡng hỗn hợp từ môi trường nuôi cấy được đặt trực tiếp vào trung tâm của slide bằng một vòng vô trùng và một vết bẩn được tạo ra bằng cách lây lan.

4. Vết bẩn được sấy khô trong không khí.

5. Vết bẩn được cố định bằng cách gia nhiệt. Việc làm nóng dẫn đến sự đông tụ của các protein của tế bào, do đó các tế bào dính vào bề mặt trượt và không bị rửa trôi trong quá trình nhuộm, quá trình cố định nhiệt được thực hiện bằng cách nhanh chóng vượt qua slide cao trên ngọn lửa 2-3 lần, với vết bẩn bề mặt hướng lên trên, để vết bẩn không bị nóng lên.

6. Vết bẩn tràn ngập vết bẩn chính, màu xanh lá cây malachite.

7. Trượt được giữ trên một tấm nóng ấm và chuẩn bị cho phép hấp trong 2-3 phút. Nhiệt độ của tấm nóng được điều chỉnh đến mức, chế phẩm không sôi và bị bay hơi nhanh. Mất mát bay hơi được bổ sung, để vết bẩn không bị khô.

8. Slide được lấy ra khỏi tấm nóng và làm mát.

9. Vết bẩn được khử màu bằng cách rửa dưới vòi nước chảy nhẹ nhàng, theo cách đó, nước không rơi trực tiếp vào vết bẩn.

10. Vết bẩn tràn ngập vết bẩn, safranin, trong 30 giây.

11. Vết bẩn quá mức được rửa sạch hoàn toàn khỏi vết bẩn dưới vòi nước chảy nhẹ nhàng, theo cách mà nước không rơi trực tiếp vào vết bẩn.

12. Slide được làm khô bằng giấy thấm.

13. Slide được cắt theo giai đoạn của kính hiển vi và vết bẩn được quan sát dưới các mục tiêu năng lượng thấp và khô cao.

14. Một giọt dầu ngâm được đưa vào vết bẩn.

15. Vết bẩn được quan sát dưới mục tiêu ngâm dầu.