Thử nghiệm thủy phân tinh bột trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân tinh bột của chúng

Thử nghiệm thủy phân tinh bột trên vi khuẩn để tìm ra khả năng thủy phân tinh bột của chúng!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng thủy phân tinh bột, vì chúng có thể tạo ra enzyme sacarolytic.

Trong khi tinh bột tạo thành màu xanh đậm với iốt, các sản phẩm cuối cùng bị thủy phân không thu được màu xanh đậm như vậy với iốt.

Trong thử nghiệm thủy phân tinh bột, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên đĩa thạch chứa tinh bột. Sau khi các khuẩn lạc của vi khuẩn được nhìn thấy, các tấm được ngập trong dung dịch iốt. Nếu vi khuẩn có khả năng thủy phân tinh bột, các khuẩn lạc của nó sẽ thủy phân tinh bột trong môi trường ở các khu vực xung quanh chúng, trong khi các khu vực còn lại của các đĩa chứa tinh bột không được thủy phân.

Kết quả là, khi ngập trong dung dịch iốt, các vùng trong suốt được hình thành xung quanh các thuộc địa, vì các sản phẩm thủy phân được hình thành xung quanh chúng không tạo thành màu xanh đậm với iốt. Mặt khác, phần còn lại của các mảng trở thành màu xanh đậm, vì iốt tạo thành màu xanh đậm với tinh bột không được thủy phân trong các khu vực này.

Vật liệu thiết yếu:

Đĩa Petri, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, thạch tinh bột, dung dịch iốt Lugol, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Hai đĩa petri được làm sạch, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su (Hình 7.21). Bước này cũng như khử trùng các đĩa petri ở bước 6 được bỏ qua, nếu các đĩa petri tiệt trùng bằng lò được sử dụng trực tiếp.

2. Các thành phần của môi trường thạch tinh bột (chứa tinh bột là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay.

3. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

4. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

5. Bình được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Hai đĩa petri và bình nón chứa môi trường thạch tinh bột được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và để nguội trong một thời gian, mà không cho phép môi trường hóa rắn. Làm mát môi trường ngăn chặn sự ngưng tụ và tích tụ các giọt nước bên trong các tấm. Nếu môi trường đã được chuẩn bị và hóa rắn trong quá trình bảo quản, nó phải được hóa lỏng bằng cách đun nóng cẩn thận cho đến khi nó tan chảy hoàn toàn.

8 môi trường nóng chảy bao phủ hoàn toàn dưới cùng của đĩa petri.

Sau đó, các tấm được phủ bằng nắp đậy của chúng và để nguội, để làm cứng môi trường trong đó. Hơi nước có thể ngưng tụ trên bề mặt bên trong của các tấm và nắp được bốc hơi bằng cách giữ các tấm và nắp ở vị trí đảo ngược trong tủ ấm ở 37 ° C trong khoảng 1 giờ.

9. Mỗi tấm được đánh dấu ở phía dưới thành bốn phần tư.

10. Cấy vi khuẩn tại chỗ của vi khuẩn thử nghiệm được thực hiện một cách vô trùng, tốt nhất là bên trong buồng chảy tầng, ở trung tâm của mỗi quý bằng cách tạo một đốm (hoặc vết nhỏ) của vi khuẩn với sự trợ giúp của vòng khử trùng ngọn lửa. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

11. Các đĩa được cấy được ủ ở vị trí đảo ngược, từ trên xuống, ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong tủ ấm cho đến khi nhìn thấy các khuẩn lạc của vi khuẩn.

12. Các tấm được ngập trong dung dịch iốt của Lugol.