Thí nghiệm tìm ra khả năng của vi khuẩn để khử các axit amin khác nhau (có hình)

Thí nghiệm để tìm ra khả năng của Vi khuẩn để khử các axit amin khác nhau!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng khử các axit amin khác nhau thành các amin và CO ₂ tương ứng vì chúng có thể tạo ra các enzyme 'axit amin decarboxylase' tương ứng.

Trong số đó, mỗi vi khuẩn có thể decarboxylate chỉ một số axit amin, trong khi nó không thể decarboxylate những loại khác.

Do đó, các axit amin, mà một vi khuẩn có thể decarboxylate và các axit amin, mà nó không thể là đặc điểm của vi khuẩn. Xét nghiệm decarboxylase axit amin được thực hiện để kiểm tra, riêng rẽ, khả năng vi khuẩn decarboxylate axit amin như lysine, ornithine và argentine với sản xuất C0 ₂ và các amin tương ứng như cadaverine, putrescine và agmatine.

Nếu vi khuẩn có thể

decarboxylate bất kỳ một hoặc nhiều axit amin, các amin tương ứng được tạo ra, có tính kiềm (cơ bản) và do đó, làm tăng độ pH thay đổi màu của bromocresol tím từ vàng sang tím.

Trong xét nghiệm axit amin decarboxylase, vi khuẩn thử nghiệm được phát triển yếm khí trong môi trường nước canh có chứa glucose, bromocresol tím và một trong các axit amin. Màu sắc của nước dùng ban đầu thay đổi từ màu tím sang màu vàng do độ pH giảm do các axit được tạo ra bởi quá trình lên men glucose. Nếu vi khuẩn có khả năng decarboxylate axit amin, màu của nước dùng chuyển từ màu vàng trở lại màu tím.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước canh decarboxylase, axit amin (lysine, ornithine, arginine), parafin lỏng, khuẩn lạc vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường nước dùng axit amin decarboxylase (chứa glucose và bromocresol tím là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 400 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 400 ml nước cất trong bình nón 500 ml bằng cách lắc và xoáy (Hình 7.11).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng 400 ml được phân phối thành bốn bình nón 250 ml, sao cho mỗi bình chứa 100 ml nước dùng.

4. Đến ba trong số các bình này, ba axit amin, chẳng hạn như lysine, ornithine và arginine được thêm vào riêng biệt (mỗi loại 0, 5 gram) và một loại được giữ mà không có bất kỳ axit amin nào để kiểm soát. Kiểm soát được sử dụng để phân biệt giữa các thay đổi màu hai bước trong môi trường thử nghiệm (nghĩa là từ màu tím sang màu vàng và từ màu vàng trở lại màu tím).

5. Nước dùng trong bốn bình hình nón được phân chia thành bốn bộ ống nghiệm riêng biệt (mỗi ống khoảng 10 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

8. Parafin lỏng được khử trùng bằng cách làm nóng ở 180 ° C trong 3 giờ trong lò không khí nóng.

9. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào trong nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

10. Parafin lỏng đã khử trùng được nhẹ nhàng đổ vô trùng vào các ống được tiêm, (cao khoảng 1 cm trên môi trường) để cung cấp điều kiện yếm khí.

11. Các ống canh được tiêm được ủ ở 37 ° C trong tủ ấm và quan sát hàng ngày cho đến khi xét nghiệm dương tính hoặc trong thời gian tối đa 4 ngày.