Thử nghiệm Methyl Red để tìm ra khả năng của vi khuẩn sử dụng Glucose (có hình)

Đọc bài viết này để tìm hiểu về xét nghiệm đỏ methyl (xét nghiệm MR), để tìm hiểu khả năng vi khuẩn sử dụng glucose với việc sản xuất axit ổn định làm sản phẩm cuối cùng!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose và chuyển đổi nó thành một loại axit ổn định như axit lactic, axit axetic hoặc axit formic làm sản phẩm cuối cùng.

Những vi khuẩn này ban đầu chuyển hóa glucose thành axit pyruvic, được chuyển hóa thêm thông qua con đường axit hỗn hợp để tạo ra axit ổn định.

Loại axit được sản xuất khác nhau từ loài này sang loài khác và phụ thuộc vào con đường enzyme cụ thể có trong vi khuẩn. Các axit được sản xuất làm giảm độ pH xuống 4, 5 hoặc thấp hơn, được biểu thị bằng sự thay đổi màu của đỏ methyl từ vàng sang đỏ.

Trong thử nghiệm đỏ methyl (thử nghiệm MR), vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong môi trường nước canh có chứa glucose. Nếu vi khuẩn có khả năng sử dụng glucose với việc sản xuất một loại axit ổn định, màu của đỏ methyl sẽ chuyển từ màu vàng sang màu đỏ, khi được thêm vào môi trường nuôi cấy.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, nước canh MR-VP (nước dùng methyl-Voges Proskauer hoặc nước đường glucose phosphat) nuôi cấy thuần chủng vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường canh MR-VP (chứa glucose là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy. Nước dùng MR-VP còn được gọi là nước dùng glucose phosphate (Hình 7.4).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 6, 9 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối thành năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 10 ml), được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

4. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

5. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

6. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

7. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong tủ ấm.

8. Dung dịch cồn của methyl đỏ (3-4 giọt) được thả vào từng ống nghiệm.

Quan sát:

1. Màu đỏ được tạo ra: MR dương tính (tức là vi khuẩn đã chuyển đổi glucose thành axit ổn định, được biểu thị bằng cách chuyển đổi màu đỏ methyl từ màu vàng sang màu đỏ. Nó chỉ ra quá trình lên men axit hỗn hợp).

2. Màu đỏ không được tạo ra: MR âm tính (nghĩa là glucose trong môi trường chưa được chuyển đổi thành axit ổn định. Điều này cho thấy quá trình lên men butylene glycol).