Thử nghiệm sử dụng Citrate để kiểm tra khả năng của vi khuẩn trong việc sử dụng Citrate như là nguồn carbon

Nhằm mục đích thực hiện kiểm tra sử dụng citrate, để tìm ra khả năng vi khuẩn sử dụng citrate làm nguồn carbon duy nhất.

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường không có chất hữu cơ C và N.

Họ có thể sử dụng natri citrat làm nguồn duy nhất của C và ammonium dihydrogen phosphate (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) làm nguồn duy nhất của N. Họ sử dụng NH ₄ H ₂ P0 ₄ để có N với sản xuất NH ₃, làm tăng Độ pH dẫn đến sự thay đổi màu của màu xanh bromothymol từ màu xanh lá cây (pH = 6, 9) sang màu xanh lam (pH trên 7, 6).

Trong thử nghiệm sử dụng citrate, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trên môi trường thạch không chứa C hoặc N hữu cơ, thay vào đó có chứa natri citrat, NH ₄ H ₂ P0 ₄ và màu xanh bromothymol. Nếu vi khuẩn có khả năng sử dụng citrate làm nguồn C duy nhất, nó cho thấy sự tăng trưởng trên môi trường. Nó cũng sử dụng NH ₄ H ₂ P0 ₄ làm nguồn N duy nhất dẫn đến sự thay đổi màu sắc của các mặt phẳng từ màu xanh lá cây sang màu xanh.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, kim tiêm, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, thạch Simmons citrate, khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường thạch Simmons citrate (chứa natri citrat, NH ₄ H, P0 ₄ và bromothymol màu xanh là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất nước trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy (Hình 7.6).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 6, 9 bằng cách sử dụng 0, 1N HC1 nếu nó nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

3. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

4. Trước khi nó đông cứng, môi trường trong điều kiện nóng chảy ấm được phân phối vào 5 ống nghiệm (mỗi ống khoảng 20 ml).

5. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Chúng được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và giữ ở vị trí xiên để làm mát và hóa rắn môi trường, để có được các lát thạch citrate.

8. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào các khe bằng cách đâm vào mông và vệt trên bề mặt của xiên với sự trợ giúp của kim khử trùng ngọn lửa. Kim được khử trùng sau mỗi lần tiêm.

9. Các xiên cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong lồng ấp.