Phương pháp sinh học đánh giá thuốc
Khi các phương pháp đánh giá vật lý hoặc hóa học hoặc số lượng mẫu rất ít không thể tạo ra kết quả khả quan trong thuốc thì thuốc được đánh giá bằng phương pháp đánh giá sinh học. Những phương pháp này được thực hiện trên động vật sống, cách ly cơ quan và mô sống, chuẩn bị động vật và vi sinh vật. Các phương pháp đánh giá sinh học được thực hiện trên cơ thể sống được gọi là xét nghiệm sinh học hoặc xét nghiệm sinh học.
Phương pháp sau đây được sử dụng như:
1. Hoạt động chống viêm của thuốc
2. Hoạt động hạ sốt của thuốc
3. Hoạt động chống tiểu đường của thuốc
4. Hoạt động giảm đau của thuốc
5. Hoạt động chống loét của thuốc
6. Hoạt động diệt nấm của thuốc: chúng được thực hiện trên giun đất
7. Hoạt động tim của thuốc: glycoside tim được đánh giá trên ếch và chim bồ câu
8. Phương pháp vi sinh: vi khuẩn sống, nấm men và nấm mốc được sử dụng để phân tích vitamin và để xác định hoạt động của thuốc kháng sinh.
Hoạt động chống viêm của thuốc:
Phương pháp phù chân:
Chuột Sprague-Dawley đực hoặc cái với trọng lượng cơ thể từ 100 đến 150 g được sử dụng. Những con vật bị bỏ đói qua đêm. Để đảm bảo hydrat hóa đồng đều, chuột nhận 5 ml nước bằng ống dạ dày (đối chứng) hoặc thuốc thử hòa tan hoặc lơ lửng trong cùng một thể tích. Ba mươi phút sau, những con chuột bị thách thức bằng cách tiêm dưới da 0, 05 ml dung dịch carrageen 1% vào bên trong chân răng của chân sau bên trái. Bàn chân được đánh dấu bằng mực ở cấp độ của malleolus bên và đắm mình trong thủy ngân cho đến dấu này.
Thể tích bàn chân được đo bằng phương pháp đo nhiệt độ ngay sau khi tiêm, lại 3 và 6 giờ, và cuối cùng là 24 giờ sau thử thách. Sự tăng thể tích chân sau 3 hoặc 6 giờ được tính bằng tỷ lệ phần trăm so với thể tích đo được ngay sau khi tiêm chất kích thích cho mỗi con vật.
Động vật được điều trị có hiệu quả cho thấy phù ít hơn nhiều. Sự khác biệt của các giá trị trung bình giữa động vật được điều trị và các nhóm đối chứng được tính cho từng khoảng thời gian và được đánh giá theo thống kê. Sự khác biệt ở các khoảng thời gian khác nhau đưa ra một số gợi ý về thời gian tác dụng chống viêm. Đường cong phản ứng với liều được chạy cho thuốc đang hoạt động và giá trị ED 50 có thể được xác định.
Phương pháp u hạt bông len:
Chuột đực Wister có trọng lượng trung bình 200 g được gây mê bằng ether. Da lưng được cạo và khử trùng bằng ethanol 70%. Một vết mổ được thực hiện ở vùng thắt lưng. Bởi một đường hầm dưới da bị cùn được hình thành và một viên bông tiệt trùng được đặt ở cả hai bên trong khu vực scapular.
Các viên này được tiêu chuẩn hóa để sử dụng trong nha khoa có trọng lượng 20 mg hoặc viên được hình thành từ bông thô, tạo ra tình trạng viêm rõ rệt hơn so với bông tẩy trắng. Các động vật được điều trị trong 7 ngày tiêm dưới da hoặc bằng miệng.
Sau đó, các con vật được hiến tế, các viên được chuẩn bị và sấy khô cho đến khi trọng lượng không đổi. Trọng lượng khô ròng, tức là sau khi trừ đi trọng lượng của viên bông được xác định. Trọng lượng trung bình của các viên của nhóm kiểm soát cũng như của nhóm thử nghiệm được tính toán. Thay đổi phần trăm trọng lượng u hạt so với nhóm kiểm soát xe được xác định.
Hoạt động hạ sốt của thuốc:
Có thể sử dụng thỏ của cả hai giới và các chủng khác nhau có trọng lượng cơ thể từ 3 đến 5 kg. Các động vật được đặt vào lồng thích hợp và cặp nhiệt điện được kết nối với một máy ghi âm tự động được đưa vào trực tràng. Các con vật được phép thích nghi với lồng trong 60 phút.
Sau đó 0, 2 ml / kg chứa 0, 2 lipg lipopolysacarit được tiêm tĩnh mạch vào tai thỏ. Sáu mươi phút sau, hợp chất thử nghiệm được tiêm dưới da hoặc bằng miệng. Nhiệt độ cơ thể được theo dõi trong ít nhất 3 giờ.
Việc giảm nhiệt độ cơ thể trong ít nhất 0, 5 ° C trong hơn 30 phút so với giá trị nhiệt độ trước khi sử dụng hợp chất thử được coi là hiệu quả tích cực. Kết quả này đã được tìm thấy sau 45 mg / kg phenylbutazone tiêm dưới da hoặc 2, 5 mg / kg Indomethacin tiêm dưới da.
Hoạt động chống đái tháo đường của thuốc:
Streptozotocin gây ra bệnh tiểu đường:
Chuột Wister đực nặng 150-220 g được nuôi bằng chế độ ăn tiêu chuẩn được tiêm tĩnh mạch 60 mg / kg streptozotocin (Calbiochem) tiêm tĩnh mạch. Như với alloxan, ba giai đoạn thay đổi đường huyết được quan sát. Ban đầu, đường huyết tăng lên, đạt giá trị 150-200 mg% sau 3 giờ. Sáu giờ sau khi dùng streptozotocin, giá trị insulin huyết thanh tăng lên gấp 4 lần, dẫn đến giai đoạn hạ đường huyết kéo theo tăng đường huyết kéo dài. Mức độ nghiêm trọng và khởi phát của các triệu chứng tiểu đường phụ thuộc vào liều streptozotocin.
Sau liều 60 mg / kg tiêm tĩnh mạch. Các triệu chứng đã xảy ra sau 24-48 giờ với tăng đường huyết lên tới 800 mg%, glucos niệu và ketonemia. Về mặt mô học, các tế bào beta bị thoái hóa hoặc thậm chí hoại tử. Một trạng thái ổn định đạt được sau 10-14 ngày cho phép sử dụng động vật để kiểm tra dược lý.
Bệnh tiểu đường do alloxan: Thỏ có trọng lượng 2, 0 đến 3, 5 kg được truyền qua tĩnh mạch tai với 150 mg / kg alloxan monohydrate (5, 0 g / 100 ml, pH 4, 5) trong 10 phút dẫn đến 70% động vật bị tăng đường huyết và uricosuric. Những con vật còn lại hoặc chết hoặc chỉ bị tăng đường huyết tạm thời.
Hoạt động giảm đau của thuốc:
Phương pháp tấm nóng:
Nhóm 10 con chuột thuộc giới tính có trọng lượng ban đầu từ 18 đến 22 g được sử dụng cho mỗi liều. Các tấm nóng, có sẵn trên thị trường, bao gồm một bề mặt được làm nóng bằng điện. Nhiệt độ được kiểm soát từ 55 ° đến 56 ° C. Đây có thể là một tấm đồng hoặc một bề mặt thủy tinh nóng. Các con vật được đặt trên đĩa nóng và thời gian cho đến khi xảy ra tình trạng liếm hoặc nhảy được ghi lại bằng đồng hồ bấm giờ. Độ trễ được ghi lại trước và sau 20, 60 và 90 phút sau khi uống hoặc tiêm dưới da theo tiêu chuẩn hoặc hợp chất thử nghiệm.
Thử nghiệm ngâm đuôi:
Chuột Wister nữ trẻ (170-210 g trọng lượng cơ thể) được sử dụng. Chúng được đặt vào các lồng hạn chế riêng lẻ để đuôi treo tự do. Các con vật được phép thích nghi với chuồng trong 30 phút trước khi thử nghiệm. Phần dưới 5 cm của đuôi được đánh dấu. Phần đuôi này được ngâm trong một cốc nước mới đầy chính xác 55 ° C. Trong vài giây, con chuột phản ứng bằng cách rút đuôi. Thời gian phản ứng được ghi lại theo đơn vị 0, 5 giây bằng đồng hồ bấm giờ. Sau mỗi lần xác định đuôi được sấy khô cẩn thận.
Thời gian phản ứng được xác định trước và định kỳ sau khi uống hoặc tiêm dưới da chất thử, ví dụ, sau 0, 5, 1, 2, 3, 4 và 6 h. Thời gian cắt của ngâm là 15 s. Thời gian rút của động vật không được điều trị là từ 1 đến 5, 5 giây. Do đó, thời gian rút tiền hơn 6 giây được coi là một phản ứng tích cực.
Phương pháp kẹp đuôi của Heffner:
Một clip động mạch được áp dụng vào gốc đuôi của chuột và thời gian phản ứng được ghi nhận. Chuột đực (chủng Charles River hoặc các chủng khác) có trọng lượng từ 18 đến 25 g được sử dụng. Nhóm kiểm soát gồm 10 con chuột. Các hợp chất thử nghiệm được tiêm dưới da cho chuột ăn hoặc động vật ăn chay. Các nhóm thử nghiệm và nhóm kiểm soát bao gồm 7-10 con chuột.
Thuốc được dùng 15, 30 hoặc 60 phút trước khi thử nghiệm. Một clip động mạch được áp dụng vào gốc đuôi (cách cơ thể khoảng 1 cm) để gây đau. Con vật nhanh chóng đáp ứng với kích thích độc hại này bằng cách cắn vào clip hoặc đuôi gần vị trí của clip. Thời gian giữa khởi phát kích thích và phản ứng được đo bằng đồng hồ bấm giờ với gia số 1/10 giây.
Hoạt động chống loét :
Thắt ống môn vị ở chuột (Shay Rat):
Những con chuột cái Wister nặng 150-170 g bị bỏ đói trong 48 giờ có quyền truy cập vào nước uống quảng cáo tự do. Trong thời gian này, chúng được nhốt một mình trong những chiếc lồng có đáy lưới thép rộng để tránh ăn thịt đồng loại và thảm họa. Mười động vật được sử dụng cho mỗi liều và làm đối chứng. Dưới gây mê ether, một vết rạch ở giữa bụng được thực hiện. Môn vị được truyền đạt, chăm sóc được thực hiện mà không làm tổn hại đến máu.
Không có nguồn cung cấp hoặc lực kéo trên môn vị xảy ra. Nắm bắt dạ dày bằng dụng cụ là phải tránh tỉ mỉ; loét khác sẽ luôn luôn phát triển tại những điểm như vậy. Thành bụng được đóng lại bằng chỉ khâu. Các hợp chất thử nghiệm được đưa ra bằng đường uống hoặc tiêm dưới da.
Các con vật được đặt trong 19 giờ trong các ống nhựa có đường kính trong 45 mm được đóng ở hai đầu bằng lưới thép. Sau đó, các động vật được hy sinh trong gây mê CO 2 . Bụng được mở ra và một dây chằng được đặt xung quanh thực quản gần với cơ hoành.
Dạ dày được loại bỏ, và các nội dung được dẫn lưu trong một ống ly tâm. Dọc theo độ cong lớn hơn, dạ dày được mở và ghim trên một cái nút chai. Niêm mạc được kiểm tra với một phạm vi vi âm thanh nổi. Ở chuột, hai phần năm trên của dạ dày tạo thành dạ cỏ với biểu mô vảy và có ít cơ chế bảo vệ chống lại tác động ăn mòn của dịch dạ dày.
Bên dưới một sườn núi giới hạn, ở phần tuyến của dạ dày, các cơ chế bảo vệ tốt hơn ở niêm mạc của hai phần năm của dạ dày so với phần thấp nhất, tạo thành lớp vỏ.
Do đó, các tổn thương xảy ra chủ yếu ở dạ cỏ và ở hang vị. Số lượng vết loét được ghi nhận và mức độ nghiêm trọng được ghi nhận với các điểm sau:
. 0 = không loét
. 1 = loét nông
. 2 = loét sâu
. 3 = thủng.
Thể tích của nội dung dạ dày được đo. Sau khi ly tâm, độ axit được xác định bằng cách chuẩn độ với NaOH 0, 1 n.
Đánh giá:
Một UI chỉ số loét được tính toán:
UI = UN + US + LÊN x 10-1
tôi. UN = trung bình số lượng vết loét trên mỗi động vật
ii. Mỹ = điểm trung bình nghiêm trọng
iii. UP = phần trăm động vật bị loét
Chỉ số loét và độ axit của nội dung dạ dày của động vật được điều trị được so sánh với kiểm soát. Sử dụng các liều khác nhau, đường cong phản ứng với liều có thể được thiết lập để hình thành vết loét và bài tiết axit dạ dày. Giá trị ID50 có thể được tính bằng phân tích xác suất, theo đó 0% tương ứng với không và 100% với sản lượng axit dạ dày kích thích tối đa.
Loét căng thẳng thông qua căng thẳng bất động:
Nhóm 10 con chuột Wister cái cho mỗi liều thuốc thử nghiệm và đối với các đối chứng có trọng lượng 150-170 g được sử dụng. Thực phẩm và nước được rút 24 giờ trước khi thí nghiệm. Sau khi uống hoặc tiêm dưới da hợp chất thử nghiệm hoặc dung dịch giả dược, động vật được gây mê nhẹ bằng ether.
Cả hai chi dưới và trên được cố định với nhau và các con vật được bọc trong ánh mắt dây. Chúng được treo theo chiều ngang trong bóng tối ở 20 ° C trong 24 giờ và cuối cùng đã hy sinh trong gây mê CO 2 . Dạ dày được lấy ra, cố định trên một tấm nút chai và số lượng và mức độ nghiêm trọng của vết loét được đăng ký với kính hiển vi stereo sử dụng các điểm số sau:
.0 = không loét
.1 = loét nông
.2 = loét sâu.
.3 = thủng
Đánh giá
Một UI chỉ số loét được tính toán:
UI = UN + US + LÊN x 10-1
UN - trung bình số lượng vết loét trên mỗi động vật.
Mỹ = điểm trung bình nghiêm trọng.
LÊN - phần trăm động vật bị loét
